กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ การแสดงโครงสร้างภายในเซลล์ของจุลินทรีย์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง วิธีกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส
![กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ การแสดงโครงสร้างภายในเซลล์ของจุลินทรีย์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง วิธีกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส](https://i0.wp.com/meduniver.com/Medical/Microbiology/Img/211.jpg)
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ช่วยให้คุณได้ภาพโครงสร้างแอนไอโซทรอปิกที่ไม่มีรอยเปื้อน (เช่น เส้นใยคอลลาเจน ไมโอไฟบริล หรือเซลล์จุลินทรีย์) หลักการของวิธีนี้ขึ้นอยู่กับการศึกษาวัตถุในแสงที่เกิดจากลำแสงสองลำที่มีโพลาไรซ์ในระนาบที่ตั้งฉากกัน
ข้าว. 11-4. แผนภาพของกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง.กล้องจุลทรรศน์รบกวน
กล้องจุลทรรศน์รบกวนผสมผสานหลักการของกล้องจุลทรรศน์แบบเฟสคอนทราสต์และโพลาไรเซชัน วิธีการนี้ใช้เพื่อให้ได้ภาพสามมิติที่ตัดกันของวัตถุที่ไม่ได้ทาสี หลักการของวิธีนี้ขึ้นอยู่กับการแยกฟลักซ์แสงในกล้องจุลทรรศน์ รังสีหนึ่งส่องผ่านวัตถุ อีกอันผ่านมันไป ลำแสงทั้งสองเชื่อมต่อกันที่ช่องมองภาพและรบกวนซึ่งกันและกัน
![](https://i0.wp.com/meduniver.com/Medical/Microbiology/Img/211.jpg)
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
วิธีกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ขึ้นอยู่กับความสามารถของสสารบางชนิดในการเรืองแสงเมื่อสัมผัสกับรังสีคลื่นสั้น ในกรณีนี้ คลื่นแสงที่ปล่อยออกมาจะยาวกว่าคลื่นที่ทำให้เกิดแสงเรืองแสง กล่าวอีกนัยหนึ่ง วัตถุฟลูออเรสเซนต์จะดูดซับแสงที่มีความยาวคลื่นหนึ่งและปล่อยแสงไปยังอีกขอบเขตหนึ่งของสเปกตรัม (รูปที่ 11-4) ตัวอย่างเช่น หากรังสีเหนี่ยวนําเป็นสีน้ำเงิน ผลเรืองแสงที่ได้อาจเป็นสีแดงหรือสีเหลือง สารเหล่านี้ (ฟลูออเรสซีนไอโซไซยาเนต, ส้มอะคริดีน, โรดามีน ฯลฯ) ใช้เป็นสีย้อมฟลูออเรสเซนต์สำหรับสังเกตวัตถุเรืองแสง (เรืองแสง) ในกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์ แสงจากแหล่งกำเนิด (หลอดปรอทความดันสูงพิเศษ) จะผ่านตัวกรองสองตัว
![](https://i2.wp.com/meduniver.com/Medical/Microbiology/Img/212.jpg)
ตัวกรองตัวแรก (สีน้ำเงิน)ดักจับแสงด้านหน้าตัวอย่างและส่งแสงความยาวคลื่นที่กระตุ้นการเรืองแสงของตัวอย่าง ดวงที่สอง (สีเหลือง) กั้นแสงสีน้ำเงิน แต่ส่งแสงสีเหลือง แดง เขียวที่ปล่อยออกมาจากวัตถุเรืองแสงและรับรู้ด้วยตา โดยทั่วไป จุลินทรีย์ที่อยู่ระหว่างการศึกษาจะถูกย้อมโดยตรงหรือใช้ AT หรือเลคตินที่ติดฉลากด้วยฟลูออโรโครม ยามีปฏิกิริยากับ Ag หรือโครงสร้างที่มีผลผูกพันกับลิแกนด์อื่นๆ ของวัตถุ กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงพบการประยุกต์ใช้อย่างกว้างขวางในการแสดงภาพผลลัพธ์ของปฏิกิริยาอิมมูโนเคมีโดยอาศัยปฏิกิริยาเฉพาะของ AT ที่มีป้ายกำกับด้วยสีย้อมเรืองแสงกับ Ag ของวัตถุที่ศึกษา ตัวเลือก ปฏิกิริยาอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์จะถูกนำเสนอในรูป 11-5 และ 11-6.
ส่งผลงานดีๆ ของคุณในฐานความรู้ได้ง่ายๆ ใช้แบบฟอร์มด้านล่าง
นักศึกษา นักศึกษาระดับบัณฑิตศึกษา นักวิทยาศาสตร์รุ่นเยาว์ ที่ใช้ฐานความรู้ในการศึกษาและการทำงาน จะรู้สึกขอบคุณเป็นอย่างยิ่ง
โพสต์เมื่อ http://www.allbest.ru/
การแนะนำ
กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์
ภาคผนวก 1
กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงเป็นวิธีที่เก่าแก่ที่สุดและในขณะเดียวกันก็เป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันทั่วไปในการศึกษาและศึกษาเซลล์พืชและสัตว์ สันนิษฐานว่าจุดเริ่มต้นของการศึกษาเซลล์นั้นเกิดจากการประดิษฐ์กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงอย่างแม่นยำ ลักษณะสำคัญของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงคือความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงซึ่งกำหนดโดยความยาวคลื่นของแสง ขีดจำกัดความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงถูกกำหนดโดยความยาวคลื่นของแสง กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงใช้เพื่อศึกษาโครงสร้างที่มีขนาดน้อยที่สุดเท่ากับความยาวคลื่นของการแผ่รังสีแสง เซลล์ที่เป็นส่วนประกอบจำนวนมากมีความหนาแน่นของแสงใกล้เคียงกัน และจำเป็นต้องได้รับการบำบัดล่วงหน้าก่อนการทำสำเนาด้วยไมโครโคปี ไม่เช่นนั้นเซลล์เหล่านั้นจะมองไม่เห็นด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไป เพื่อให้มองเห็นได้จึงใช้สีย้อมหลายชนิดที่สามารถเลือกได้บางอย่าง การใช้สีย้อมแบบเลือกจะทำให้สามารถศึกษาโครงสร้างภายในของเซลล์ได้ละเอียดยิ่งขึ้น
ตัวอย่างเช่น:
สีย้อม hematoxylin จะทำให้ส่วนประกอบบางส่วนของนิวเคลียสสีน้ำเงินหรือสีม่วง
หลังการรักษาด้วย phloroglucinol ตามลำดับแล้วตามด้วยกรดไฮโดรคลอริก เยื่อหุ้มเซลล์ที่ถูกทำให้เป็นลิกไนต์จะกลายเป็นสีแดงเชอร์รี่
ซูดาน III คราบสีย้อมเยื่อหุ้มเซลล์ suberized สีชมพู;
สารละลายไอโอดีนอ่อนในโพแทสเซียมไอโอไดด์จะเปลี่ยนเมล็ดแป้งเป็นสีน้ำเงิน”
เมื่อทำการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ เนื้อเยื่อส่วนใหญ่จะได้รับการแก้ไขก่อนที่จะทำการย้อมสี
เมื่อแก้ไขแล้ว เซลล์จะซึมผ่านสีย้อมได้และโครงสร้างเซลล์จะคงตัว สารยึดเกาะที่พบบ่อยที่สุดในพฤกษศาสตร์คือเอทิลแอลกอฮอล์
ในระหว่างการเตรียมการเตรียมการสำหรับการทำสำเนาด้วยกล้องจุลทรรศน์จะมีการสร้างส่วนบาง ๆ บนไมโครโตม (ภาคผนวก 1 รูปที่ 1) อุปกรณ์นี้ใช้หลักการของเครื่องตัดขนมปัง ส่วนที่หนากว่าเล็กน้อยมีไว้สำหรับเนื้อเยื่อพืชมากกว่าเนื้อเยื่อของสัตว์ เนื่องจากเซลล์พืชมีขนาดค่อนข้างใหญ่ ความหนาของส่วนเนื้อเยื่อพืชสำหรับ - 10 ไมครอน - 20 ไมครอน ทิชชู่บางชนิดอ่อนเกินกว่าจะตัดออกทันที ดังนั้นหลังจากการตรึงแล้วจึงเทลงในพาราฟินหลอมเหลวหรือเรซินพิเศษซึ่งจะทำให้เนื้อผ้าเปียกโชก หลังจากเย็นตัวลง จะเกิดบล็อกแข็งขึ้น จากนั้นจึงตัดโดยใช้ไมโครโตม สิ่งนี้อธิบายได้จากข้อเท็จจริงที่ว่าเซลล์พืชมีผนังเซลล์ที่แข็งแรงซึ่งประกอบเป็นโครงร่างเนื้อเยื่อ เปลือกอ่อนมีความแข็งแรงเป็นพิเศษ
เมื่อใช้ไส้ในระหว่างการเตรียม การตัดจะเสี่ยงต่อการทำลายโครงสร้างเซลล์ เพื่อป้องกันสิ่งนี้ ให้ใช้วิธีแช่แข็งอย่างรวดเร็ว เมื่อใช้วิธีนี้ คุณสามารถทำได้โดยไม่ต้องซ่อมและเติม เนื้อเยื่อแช่แข็งถูกตัดโดยใช้ไมโครโตมพิเศษ - ไครโอโตม (ภาคผนวก 1 รูปที่ 2)
ส่วนที่แช่แข็งจะรักษาลักษณะโครงสร้างตามธรรมชาติได้ดีขึ้น อย่างไรก็ตาม พวกมันปรุงยากกว่าและการมีผลึกน้ำแข็งทำให้รายละเอียดบางส่วนเสียหาย
คอนทราสต์เฟส (ภาคผนวก 1 รูปที่ 3) และกล้องจุลทรรศน์รบกวน (ภาคผนวก 1 รูปที่ 4) ช่วยให้คุณสามารถตรวจสอบเซลล์ที่มีชีวิตภายใต้กล้องจุลทรรศน์โดยแสดงรายละเอียดของโครงสร้างได้ชัดเจน กล้องจุลทรรศน์เหล่านี้ใช้ลำแสง 2 ลำที่มีปฏิสัมพันธ์ (ซ้อน) ซึ่งกันและกัน เพื่อเพิ่มหรือลดความกว้างของคลื่นที่เข้าสู่ดวงตาจากส่วนประกอบต่างๆ ของเซลล์
กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงมีหลายแบบ
วิธีการสนามสว่างและพันธุ์ของมัน
วิธีสนามแสงที่ส่งผ่านใช้ในการศึกษาการเตรียมการโปร่งใสที่มีอนุภาคและรายละเอียดที่ดูดซับแสง (ส่วนสีบาง ๆ ของเนื้อเยื่อสัตว์และพืช, ส่วนแร่ธาตุบาง ๆ) ในกรณีที่ไม่มียา ลำแสงจากคอนเดนเซอร์ที่ผ่านเลนส์จะสร้างสนามที่ส่องสว่างสม่ำเสมอใกล้กับระนาบโฟกัสของช่องมองภาพ หากมีองค์ประกอบดูดซับในการเตรียมการ การดูดซับบางส่วนและการกระเจิงของแสงบางส่วนจะเกิดขึ้นซึ่งทำให้เกิดภาพที่ปรากฏ นอกจากนี้ยังสามารถใช้วิธีนี้เมื่อสังเกตวัตถุที่ไม่ดูดซับ แต่เฉพาะในกรณีที่ลำแสงกระจายแสงอย่างแรงจนส่วนสำคัญของวัตถุไม่ตกเข้าไปในเลนส์
วิธีการให้แสงเฉียง- การเปลี่ยนแปลงของวิธีการก่อนหน้า ความแตกต่างระหว่างสิ่งเหล่านั้นคือแสงส่องไปที่วัตถุในมุมกว้างไปยังทิศทางของการสังเกต บางครั้งวิธีนี้จะช่วยเผยให้เห็น “ความนูน” ของวัตถุอันเนื่องมาจากการก่อตัวของเงา
วิธีสนามสว่างในแสงสะท้อนใช้ในการศึกษาวัตถุสะท้อนแสงทึบแสง เช่น โลหะหรือแร่บางๆ การเตรียมการจะได้รับแสงสว่าง (จากไฟส่องสว่างและกระจกโปร่งแสง) จากด้านบนผ่านเลนส์ ซึ่งมีบทบาทเป็นคอนเดนเซอร์ไปพร้อมๆ กัน ในภาพที่สร้างขึ้นในระนาบโดยเลนส์ร่วมกับเลนส์หลอด โครงสร้างของการเตรียมการสามารถมองเห็นได้เนื่องจากความแตกต่างในการสะท้อนแสงขององค์ประกอบ ในสนามที่สว่าง ความไม่สอดคล้องกันที่กระจายแสงตกกระทบยังโดดเด่นเช่นกัน
วิธีการสนามมืดและการแปรผันของมัน
วิธีการส่งแสงสนามมืดใช้เพื่อให้ได้ภาพของวัตถุโปร่งใสและไม่ดูดซับซึ่งไม่สามารถมองเห็นได้โดยใช้วิธีสนามสว่าง สิ่งเหล่านี้มักเป็นวัตถุทางชีวภาพ แสงจากไฟส่องสว่างและกระจกส่องตรงไปยังการเตรียมโดยคอนเดนเซอร์ที่ออกแบบมาเป็นพิเศษ - ที่เรียกว่า คอนเดนเซอร์สนามมืด เมื่อออกจากคอนเดนเซอร์ ส่วนหลักของรังสีแสงซึ่งไม่เปลี่ยนทิศทางเมื่อผ่านสารเตรียมที่โปร่งใสจะก่อตัวเป็นลำแสงในรูปกรวยกลวงและไม่เข้าไปในเลนส์ (ซึ่งอยู่ภายในกรวยนี้) . ภาพในกล้องจุลทรรศน์เกิดขึ้นโดยใช้รังสีเพียงส่วนเล็กๆ ที่กระจัดกระจายโดยอนุภาคขนาดเล็กของตัวยาที่อยู่บนสไลด์เข้าไปในกรวยและผ่านเลนส์ ในมุมมองของพื้นหลังสีเข้มจะมองเห็นภาพแสงขององค์ประกอบโครงสร้างของยาซึ่งแตกต่างจากสภาพแวดล้อมโดยรอบในดัชนีการหักเหของแสง อนุภาคขนาดใหญ่มีเพียงขอบสว่างที่กระจายรังสีแสง เมื่อใช้วิธีนี้ ไม่สามารถระบุจากลักษณะของภาพได้ว่าอนุภาคมีความโปร่งใสหรือทึบแสง หรือมีดัชนีการหักเหของแสงสูงหรือต่ำกว่าเมื่อเทียบกับตัวกลางที่อยู่รอบๆ
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนตัวแรกถูกสร้างขึ้นในปี พ.ศ. 2474 โดย Knoll และ Ruska ในประเทศเยอรมนี เฉพาะในยุค 50 เท่านั้นที่มีการพัฒนาวิธีการผลิตชิ้นส่วนที่มีคุณสมบัติที่จำเป็น
ความยากของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนคือจำเป็นต้องมีการประมวลผลพิเศษเพื่อศึกษาตัวอย่างทางชีววิทยา
ปัญหาแรกคืออิเล็กตรอนมีพลังทะลุทะลวงจำกัดมาก จึงต้องเตรียมส่วนที่บางเฉียบซึ่งมีความหนา 50 - 100 นาโนเมตร เพื่อให้ได้ส่วนที่บางดังกล่าว เนื้อเยื่อจะถูกชุบด้วยเรซินก่อน: เรซินจะเกิดปฏิกิริยาโพลีเมอร์เพื่อสร้างบล็อกพลาสติกแข็ง จากนั้นใช้มีดแก้วคมๆ หรือมีดเพชร ตัดส่วนต่างๆ บนไมโครโตมแบบพิเศษ
มีปัญหาอีกอย่างหนึ่งคือเมื่ออิเล็กตรอนผ่านเนื้อเยื่อชีวภาพจะไม่ได้ภาพที่ตัดกัน เพื่อให้ได้ความแตกต่าง ตัวอย่างทางชีวภาพบางส่วนจะถูกชุบด้วยเกลือของโลหะหนัก
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนมีสองประเภทหลัก ในกล้องจุลทรรศน์แบบส่องผ่าน (ส่งสัญญาณ) ลำแสงอิเล็กตรอนที่ผ่านตัวอย่างที่เตรียมไว้เป็นพิเศษจะทิ้งภาพไว้บนหน้าจอ ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่านสมัยใหม่นั้นมากกว่าความละเอียดของแสงเกือบ 400 เท่า กล้องจุลทรรศน์เหล่านี้มีความละเอียดประมาณ 0.5 นาโนเมตร
แม้จะมีความละเอียดสูง แต่กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่านก็มีข้อเสียที่สำคัญ:
คุณต้องทำงานกับวัสดุคงที่
ภาพบนหน้าจอเป็นแบบสองมิติ (แบน)
เมื่อบำบัดด้วยโลหะหนัก โครงสร้างเซลล์บางส่วนจะถูกทำลายและดัดแปลง
ภาพสามมิติ (ปริมาตร) ได้มาจากกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (EM) ในกรณีนี้ลำแสงจะไม่ผ่านตัวอย่าง แต่จะสะท้อนจากพื้นผิว
ตัวอย่างทดสอบได้รับการแก้ไขและทำให้แห้ง จากนั้นจึงหุ้มด้วยชั้นโลหะบางๆ การดำเนินการที่เรียกว่าการแรเงา (ตัวอย่างจะถูกแรเงา)
ในการสแกน EM ลำแสงอิเล็กตรอนที่โฟกัสจะถูกส่งไปยังตัวอย่างโดยตรง (ตัวอย่างจะถูกสแกน) เป็นผลให้พื้นผิวโลหะของตัวอย่างปล่อยอิเล็กตรอนทุติยภูมิที่มีพลังงานต่ำออกมา จะถูกบันทึกและแปลงเป็นภาพบนหน้าจอโทรทัศน์ ความละเอียดสูงสุดของกล้องจุลทรรศน์สแกนมีขนาดเล็กประมาณ 10 นาโนเมตร แต่ภาพจะเป็นสามมิติ
ประเภทของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน:
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบแอมพลิจูด- วิธีใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบแอมพลิจูดสามารถใช้ในการประมวลผลภาพของวัตถุอสัณฐานและวัตถุอื่น ๆ (ขนาดอนุภาคซึ่งเล็กกว่าระยะทางที่แก้ไขได้ในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน) ซึ่งกระจายอิเล็กตรอนอย่างกระจัดกระจาย ตัวอย่างเช่น ในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน คอนทราสต์ของภาพ กล่าวคือ ความแตกต่างของความสว่างของภาพของพื้นที่ข้างเคียงของวัตถุ ในการประมาณครั้งแรก จะเป็นสัดส่วนกับความแตกต่างของความหนาของพื้นที่เหล่านี้
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบเฟส- เพื่อคำนวณความแตกต่างของภาพของวัตถุผลึกที่มีโครงสร้างปกติตลอดจนแก้ปัญหาผกผัน - คำนวณโครงสร้างของวัตถุจากภาพที่สังเกตได้ - ใช้วิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบเฟส พิจารณาปัญหาของการเลี้ยวเบนของคลื่นอิเล็กตรอนบนโครงตาข่ายคริสตัลซึ่งวิธีแก้ปัญหายังคำนึงถึงปฏิกิริยาที่ไม่ยืดหยุ่นของอิเล็กตรอนกับวัตถุด้วย: การกระเจิงของพลาสมา, โฟนันส์ ฯลฯ ในการส่องผ่านกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนและการส่งผ่านการสแกนความละเอียดสูง ได้รับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนภาพของแต่ละโมเลกุลหรืออะตอมของธาตุหนัก การใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบเฟสทำให้สามารถสร้างโครงสร้างสามมิติของผลึกและโมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีววิทยาขึ้นมาใหม่จากภาพได้
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนเชิงปริมาณ- วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนเชิงปริมาณเป็นการวัดที่แม่นยำของพารามิเตอร์ต่างๆ ของตัวอย่างหรือกระบวนการภายใต้การศึกษา เช่น การวัดศักย์ไฟฟ้าในพื้นที่ สนามแม่เหล็ก จุลเรขาคณิตของการบรรเทาพื้นผิว เป็นต้น
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบลอเรนซ์- สาขาวิชาศึกษากล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบลอเรนซ์ซึ่งศึกษาปรากฏการณ์ที่เกิดจากแรงลอเรนซ์ ได้แก่ สนามแม่เหล็กและสนามไฟฟ้าภายในหรือสนามเร่ร่อนภายนอก เช่น สนามโดเมนแม่เหล็กในฟิล์มบาง โดเมนเฟอร์โรอิเล็กทริก สนามศีรษะ สำหรับการบันทึกข้อมูลแบบแม่เหล็ก ฯลฯ
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์เป็นวิธีการสังเกตในแสงโพลาไรซ์สำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ของสารเตรียมที่มีองค์ประกอบแอนไอโซทรอปิกเชิงแสง (หรือประกอบด้วยองค์ประกอบดังกล่าวทั้งหมด) ซึ่งรวมถึงแร่ธาตุหลายชนิด เมล็ดพืชในส่วนโลหะผสมบางๆ เนื้อเยื่อของสัตว์และพืชบางชนิด เป็นต้น การสังเกตสามารถทำได้ทั้งแสงที่ส่องผ่านและแสงสะท้อน แสงที่ปล่อยออกมาจากตัวส่องสว่างจะถูกส่งผ่านโพลาไรเซอร์ โพลาไรเซชันที่ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงตามการผ่านของแสงในเวลาต่อมาผ่านการเตรียมการ (หรือการสะท้อนจากมัน) ศึกษาการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้โดยใช้เครื่องวิเคราะห์และเครื่องชดเชยแสงต่างๆ ด้วยการวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงดังกล่าว เราสามารถตัดสินลักษณะทางแสงหลักของวัตถุขนาดเล็กแบบแอนไอโซทรอปิกได้ ได้แก่ ความแรงของการเกิดปฏิกิริยาไบรีฟรินเจนซ์ จำนวนแกนแสงและการวางแนวของพวกมัน การหมุนของระนาบโพลาไรเซชัน และไดโครอิซึม
วิธีคอนทราสต์เฟส
วิธี ความคมชัดของเฟสและความหลากหลายของมัน - สิ่งที่เรียกว่า วิธี ความคมชัดแบบ "anoptral"ได้รับการออกแบบมาเพื่อให้ได้ภาพของวัตถุโปร่งใสและไม่มีสีซึ่งมองไม่เห็นเมื่อสังเกตโดยใช้วิธีสนามสว่าง ซึ่งรวมถึงเนื้อเยื่อของสัตว์ที่ไม่ย้อมสีที่มีชีวิต สาระสำคัญของวิธีการคือถึงแม้จะมีความแตกต่างเล็กน้อยในดัชนีการหักเหขององค์ประกอบต่าง ๆ ของการเตรียมการ แต่คลื่นแสงที่ผ่านเข้าไปจะประสบกับการเปลี่ยนแปลงเฟสที่แตกต่างกัน (ได้รับสิ่งที่เรียกว่าการผ่อนปรนเฟส) เมื่อไม่รับรู้ด้วยตาหรือแผ่นถ่ายภาพโดยตรง การเปลี่ยนแปลงเฟสเหล่านี้จะถูกแปลงด้วยความช่วยเหลือของอุปกรณ์ออพติคอลพิเศษเป็นการเปลี่ยนแปลงในความกว้างของคลื่นแสง กล่าวคือ เป็นการเปลี่ยนแปลงในความสว่าง (“การผ่อนผันของแอมพลิจูด”) ซึ่งก็คือ มองเห็นได้ด้วยตาแล้วหรือบันทึกไว้ในชั้นไวแสง กล่าวอีกนัยหนึ่ง ในภาพที่มองเห็นได้ การกระจายความสว่าง (แอมพลิจูด) จะสร้างการผ่อนปรนเฟสขึ้นมาใหม่ ภาพที่ได้รับในลักษณะนี้เรียกว่าเฟสคอนทราสต์
แผนภาพการทำงานโดยทั่วไปของวิธีการนี้: มีการติดตั้งไดอะแฟรมรูรับแสงไว้ที่โฟกัสด้านหน้าของคอนเดนเซอร์ ซึ่งมีรูที่มีรูปร่างเป็นวงแหวน ภาพของมันปรากฏใกล้กับโฟกัสด้านหลังของเลนส์และสิ่งที่เรียกว่า แผ่นเฟสบนพื้นผิวซึ่งมีส่วนที่ยื่นออกมาเป็นรูปวงแหวนหรือร่องวงแหวน เรียกว่าวงแหวนเฟส แผ่นเฟสไม่ได้ถูกวางไว้ที่โฟกัสของเลนส์เสมอไป - บ่อยครั้งที่วงแหวนเฟสจะถูกติดโดยตรงกับพื้นผิวของเลนส์ใกล้วัตถุตัวใดตัวหนึ่ง
ไม่ว่าในกรณีใด รังสีจากตัวส่องสว่างที่ไม่เบี่ยงเบนไปในการเตรียม ซึ่งทำให้เกิดภาพของไดอะแฟรม จะต้องผ่านวงแหวนเฟสโดยสมบูรณ์ ซึ่งจะทำให้พวกมันอ่อนลงอย่างมาก (ถูกดูดซับ) และเปลี่ยนเฟสเป็น l/4 (l คือความยาวคลื่นของแสง) และรังสีแม้จะเบี่ยงเบนเล็กน้อย (กระจัดกระจาย) ในการเตรียมการก็ผ่านแผ่นเฟสผ่านวงแหวนเฟสและไม่ได้รับการเปลี่ยนเฟสเพิ่มเติม
เมื่อพิจารณาถึงการเปลี่ยนเฟสในวัสดุเตรียม ผลต่างเฟสรวมระหว่างลำแสงที่เบนเบนและไม่เบี่ยงเบนจะใกล้เคียงกับ 0 หรือ l/2 และเป็นผลมาจากการรบกวนของแสงในระนาบภาพของการเตรียม เสริมหรืออ่อนแรงซึ่งกันและกันอย่างเห็นได้ชัดทำให้ได้ภาพโครงสร้างของการเตรียมการที่ตัดกัน รังสีที่หักเหจะมีแอมพลิจูดที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับรังสีที่ไม่เบี่ยงเบน ดังนั้น การทำให้ลำแสงหลักในวงแหวนเฟสอ่อนลง การนำค่าแอมพลิจูดเข้ามาใกล้กันมากขึ้น ยังนำไปสู่ความคมชัดของภาพมากขึ้น
วิธีการนี้ทำให้สามารถแยกแยะองค์ประกอบโครงสร้างขนาดเล็กที่มีความเปรียบต่างต่ำมากในวิธีสนามสว่างได้ อนุภาคโปร่งใสซึ่งมีขนาดค่อนข้างเล็กจะกระจายรังสีแสงในมุมเล็กๆ ที่รังสีเหล่านี้ส่องผ่านร่วมกับมุมที่ไม่เบี่ยงเบนผ่านวงแหวนเฟส สำหรับอนุภาคดังกล่าว เอฟเฟกต์ความเปรียบต่างเฟสจะเกิดขึ้นใกล้กับเส้นขอบเท่านั้น ซึ่งเกิดการกระเจิงที่รุนแรง
วิธีการสังเกตด้วยอินฟราเรด
วิธี การสังเกตในอินฟราเรดรังสี (IR) ยังต้องแปลงภาพที่ตามองไม่เห็นให้เป็นภาพที่มองเห็นได้โดยใช้ภาพถ่ายหรือใช้ตัวแปลงออปติคัลอิเล็กตรอน กล้องจุลทรรศน์อินฟราเรดทำให้สามารถศึกษาโครงสร้างภายในของวัตถุที่มีความทึบแสงในแสงที่มองเห็นได้ เช่น แว่นตาดำ ผลึกและแร่ธาตุบางชนิด เป็นต้น
วิธีการสังเกตรังสีอัลตราไวโอเลต
วิธี การสังเกตในรังสีอัลตราไวโอเลต (UV)ทำให้สามารถเพิ่มความละเอียดสูงสุดของกล้องจุลทรรศน์ได้ ข้อได้เปรียบหลักของวิธีนี้ก็คือ อนุภาคของสารหลายชนิดซึ่งโปร่งใสในแสงที่มองเห็น จะดูดซับรังสี UV อย่างมากในช่วงความยาวคลื่นบางช่วง ดังนั้นจึงแยกแยะได้ง่ายในภาพ UV สารหลายชนิดที่มีอยู่ในเซลล์พืชและสัตว์ (เบสพิวรีน เบสไพริมิดีน วิตามินส่วนใหญ่ กรดอะมิโนอะโรมาติก ไขมันบางชนิด ไทรอกซีน ฯลฯ) มีสเปกตรัมการดูดกลืนแสงที่มีลักษณะเฉพาะในบริเวณที่มีรังสียูวี
เนื่องจากรังสีอัลตราไวโอเลตไม่สามารถมองเห็นได้ด้วยตามนุษย์ ภาพในกล้องจุลทรรศน์ยูวีจึงถูกบันทึกด้วยภาพถ่ายหรือใช้ตัวแปลงแสงแบบอิเล็กตรอนหรือหน้าจอฟลูออเรสเซนต์ ยานี้ถูกถ่ายภาพในช่วงความยาวคลื่น UV สามช่วง ผลลัพธ์เนกาทีฟแต่ละภาพจะถูกส่องสว่างด้วยสีเฉพาะของแสงที่มองเห็นได้ (เช่น สีฟ้า สีเขียว และสีแดง) และทั้งหมดจะถูกฉายบนหน้าจอเดียวพร้อมกัน ผลลัพธ์ที่ได้คือภาพสีของวัตถุในสีธรรมดา ขึ้นอยู่กับความสามารถในการดูดซับของยาในแสงอัลตราไวโอเลต
ภาพไมโครและภาพยนตร์ขนาดเล็ก- นี่คือการได้มาของภาพบนชั้นไวแสงโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ วิธีนี้ใช้กันอย่างแพร่หลายร่วมกับวิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์วิธีอื่นๆ ทั้งหมด สำหรับการถ่ายภาพไมโครและโรงภาพยนตร์ขนาดเล็ก จำเป็นต้องมีการปรับโครงสร้างระบบการมองเห็นของกล้องจุลทรรศน์ใหม่ ซึ่งแตกต่างจากการสังเกตการโฟกัสของเลนส์ใกล้ตาด้วยสายตาโดยสัมพันธ์กับภาพที่เลนส์กำหนด การถ่ายภาพไมโครเป็นสิ่งจำเป็นเมื่อบันทึกงานวิจัย เมื่อศึกษาวัตถุในรังสียูวีและรังสีอินฟราเรดที่ตามองไม่เห็น (ดูด้านบน) รวมถึงวัตถุที่มีความเข้มของการเรืองแสงต่ำ การถ่ายภาพไมโครฟิล์มเป็นสิ่งที่ขาดไม่ได้ในการศึกษากระบวนการที่เกิดขึ้นเมื่อเวลาผ่านไป (กิจกรรมที่สำคัญของเซลล์เนื้อเยื่อและจุลินทรีย์ การเจริญเติบโตของผลึก การเกิดปฏิกิริยาเคมีอย่างง่าย ๆ ฯลฯ)
วิธีการตัดกันสัญญาณรบกวน
วิธีการตัดกันสัญญาณรบกวน (กล้องจุลทรรศน์รบกวน) ประกอบด้วยการแยกแต่ละลำแสงเมื่อเข้าสู่กล้องจุลทรรศน์ รังสีที่เกิดขึ้นดวงหนึ่งจะถูกส่งผ่านอนุภาคที่สังเกตได้ ส่วนอีกรังสีหนึ่งจะผ่านไปตามสาขาแสงเดียวกันหรือเพิ่มเติมของกล้องจุลทรรศน์ ในส่วนช่องมองภาพของกล้องจุลทรรศน์ ลำแสงทั้งสองจะเชื่อมต่อกันอีกครั้งและรบกวนซึ่งกันและกัน คอนเดนเซอร์และเลนส์มีการติดตั้งแผ่นไบรีฟริงเจนท์ ซึ่งแผ่นแรกจะแยกลำแสงเดิมออกเป็นสองลำแสง และแผ่นที่สองกลับมารวมกันอีกครั้ง รังสีดวงหนึ่งที่ผ่านวัตถุนั้นมีความล่าช้าในระยะ (ได้รับความแตกต่างของเส้นทางเมื่อเทียบกับรังสีดวงที่สอง) ขนาดของความล่าช้านี้วัดโดยตัวชดเชย วิธีนี้ทำให้สามารถสังเกตวัตถุโปร่งใสและไม่มีสีได้ แต่ภาพของวัตถุนั้นอาจมีหลายสีได้ (สีรบกวน) วิธีนี้เหมาะสำหรับการศึกษาเนื้อเยื่อและเซลล์ของสิ่งมีชีวิต และใช้ในหลายกรณีเพื่อจุดประสงค์นี้ วิธีตัดกันสัญญาณรบกวนมักใช้ร่วมกับวิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์อื่นๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งการสังเกตในแสงโพลาไรซ์ การใช้ร่วมกับกล้องจุลทรรศน์อัลตราไวโอเลตทำให้สามารถตรวจสอบปริมาณกรดนิวคลีอิกในมวลแห้งทั้งหมดของวัตถุได้
วิธีการวิจัยแสงเรืองแสง
วิธี ศึกษาเรื่องแสงเรืองแสงประกอบด้วยการสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ถึงแสงสีเขียวส้มของวัตถุขนาดเล็ก ซึ่งเกิดขึ้นเมื่อวัตถุเหล่านั้นถูกส่องสว่างด้วยแสงสีน้ำเงินม่วงหรือรังสีอัลตราไวโอเลตที่มองไม่เห็นด้วยตา มีการนำฟิลเตอร์แสงสองตัวเข้าไปในวงจรแสงของกล้องจุลทรรศน์ หนึ่งในนั้นวางอยู่หน้าคอนเดนเซอร์ โดยจะส่งรังสีจากแหล่งกำเนิดของตัวส่องสว่างเฉพาะในช่วงความยาวคลื่นที่กระตุ้นการเรืองแสงของวัตถุเอง (การเรืองแสงจากภายใน) หรือสีย้อมพิเศษที่ใส่เข้าไปในสารเตรียมและดูดซับโดยอนุภาคของวัตถุ (การเรืองแสงทุติยภูมิ) ฟิลเตอร์กรองแสงตัวที่สองซึ่งติดตั้งอยู่หลังเลนส์ จะส่งเฉพาะแสงเรืองแสงไปยังดวงตาของผู้สังเกต (หรือไปยังชั้นแสง) กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ใช้การส่องสว่างของการเตรียมทั้งจากด้านบน (ผ่านเลนส์ซึ่งในกรณีนี้ยังทำหน้าที่เป็นคอนเดนเซอร์ด้วย) และจากด้านล่างผ่านคอนเดนเซอร์ปกติ วิธีการดังกล่าวพบการใช้งานอย่างกว้างขวางในด้านจุลชีววิทยา ไวรัสวิทยา มิญชวิทยา เซลล์วิทยา ในอุตสาหกรรมอาหาร ในการวิจัยดิน การวิเคราะห์จุลเคมี และการตรวจจับข้อบกพร่อง การใช้งานที่หลากหลายนี้อธิบายได้ด้วยความไวของสีที่สูงมากของดวงตาและความเปรียบต่างสูงของภาพของวัตถุที่เรืองแสงได้เองบนพื้นหลังที่มืดและไม่เรืองแสง
วิธีการจำลองแบบ
วิธีการจำลองนี้ใช้เพื่อศึกษาโครงสร้างทางเรขาคณิตของพื้นผิวของวัตถุขนาดใหญ่ รอยประทับจะถูกนำมาจากพื้นผิวของวัตถุดังกล่าวในรูปแบบของฟิล์มบางๆ ของคาร์บอน คอลโลเดียน ฟอร์มวาร์ ฯลฯ ทำซ้ำการผ่อนปรนของพื้นผิวและตรวจสอบในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน โดยปกติแล้ว ที่มุมเลื่อน (เล็กจนถึงพื้นผิว) ชั้นของโลหะหนักที่กระจายอิเล็กตรอนอย่างรุนแรงจะถูกพ่นลงบนแบบจำลองในสุญญากาศ เพื่อบังส่วนที่ยื่นออกมาและรอยกดของรูปทรงเรขาคณิต
วิธีการตกแต่ง
วิธีการตกแต่งไม่เพียงตรวจสอบโครงสร้างทางเรขาคณิตของพื้นผิวเท่านั้น แต่ยังตรวจสอบไมโครฟิลด์ที่เกิดจากการเคลื่อนตัว การสะสมของจุดบกพร่อง ระยะการเจริญเติบโตของผิวหน้าผลึก โครงสร้างโดเมน ฯลฯ ตามวิธีนี้ ชั้นอนุภาคตกแต่งที่บางมาก (อะตอม Au) จะถูกสะสมเป็นครั้งแรกบนพื้นผิวตัวอย่าง, Pt ฯลฯ ซึ่งเป็นโมเลกุลของเซมิคอนดักเตอร์หรือไดอิเล็กทริก) โดยส่วนใหญ่จะสะสมในบริเวณที่มีไมโครฟิลด์เข้มข้น จากนั้นแบบจำลองที่มีการรวมอนุภาคตกแต่งจะถูกลบออก
เพื่อให้ได้เศษส่วนของเซลล์ มีการใช้การหมุนเหวี่ยงประเภทต่างๆ อย่างกว้างขวาง ได้แก่ การปั่นแยกแบบดิฟเฟอเรนเชียล การปั่นแยกแบบโซน และการปั่นเหวี่ยงไล่ระดับความหนาแน่นสมดุล ประเด็นทางทฤษฎีและการปฏิบัติที่เกี่ยวข้องกับการหมุนเหวี่ยงนั้นมีการอภิปรายอย่างครอบคลุมในการทบทวนของ Sykes
การหมุนเหวี่ยงแบบดิฟเฟอเรนเชียล
ในกรณีของการปั่นเหวี่ยงแบบดิฟเฟอเรนเชียล ตัวอย่างจะถูกปั่นแยกเป็นระยะเวลาหนึ่งด้วยความเร็วที่กำหนด หลังจากนั้นจึงเอาส่วนลอยเหนือตะกอนออก วิธีการนี้มีประโยชน์สำหรับการแยกอนุภาคที่มีอัตราการตกตะกอนแตกต่างกันอย่างมาก ตัวอย่างเช่น การปั่นแยกเป็นเวลา 5-10 นาทีที่ 3,000-5,000 d ทำให้เกิดการตกตะกอนของเซลล์แบคทีเรียที่ไม่เสียหาย ในขณะที่ชิ้นส่วนของเซลล์ส่วนใหญ่ยังคงอยู่ในส่วนเหนือตะกอน เศษผนังเซลล์และโครงสร้างเมมเบรนขนาดใหญ่สามารถถูกอัดเป็นก้อนได้โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 20,000-50,000 § เป็นเวลา 20 นาที ในขณะที่ถุงเมมเบรนขนาดเล็กและไรโบโซมต้องการการหมุนเหวี่ยงที่ 200,000 § เป็นเวลา 1 ชั่วโมงจึงจะทำให้เกิดเป็นเม็ด
การหมุนเหวี่ยงแบบโซน
การหมุนเหวี่ยงแบบโซนเป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพในการแยกโครงสร้างที่มีความหนาแน่นลอยตัวใกล้เคียงกัน แต่มีรูปร่างและมวลของอนุภาคต่างกัน ตัวอย่าง ได้แก่ การแยกหน่วยย่อยของไรโบโซม โพลีโซมประเภทต่างๆ และโมเลกุล DNA ที่มีรูปร่างต่างกัน การหมุนเหวี่ยงจะดำเนินการในโรเตอร์แบบถังหรือในโรเตอร์แบบโซนที่ออกแบบเป็นพิเศษ เพื่อป้องกันการพาความร้อนในระหว่างการปั่นแยก การไล่ระดับแบบอ่อน (โดยปกติคือซูโครส) จะถูกสร้างขึ้นในบีกเกอร์โรเตอร์ของถังหรือในห้องโรเตอร์แบบโซน ตัวอย่างจะถูกนำไปใช้ในรูปแบบของโซนหรือแถบแคบที่ด้านบนสุดของคอลัมน์ไล่ระดับสี สำหรับอนุภาคที่อยู่ต่ำกว่าเซลล์ โดยทั่วไปจะใช้ซูโครสเกรเดียนต์ที่ 15 ถึง 40% (w/v)
วิธีเลา
ใช้สำหรับคริสตัลเดี่ยว ตัวอย่างถูกฉายรังสีด้วยลำแสงที่มีสเปกตรัมต่อเนื่องกัน การวางแนวของลำแสงและคริสตัลไม่เปลี่ยนแปลง การกระจายเชิงมุมของรังสีที่เลี้ยวเบนมีรูปแบบของจุดเลี้ยวเบนแต่ละจุด (Lauegram)
วิธีเดบาย-เชอร์เรอร์
ใช้เพื่อศึกษาโพลีคริสตัลและสารผสม การวางแนวแบบสุ่มของผลึกในตัวอย่างสัมพันธ์กับลำแสงเอกรงค์เดียวที่ตกกระทบจะเปลี่ยนลำแสงที่เลี้ยวเบนให้กลายเป็นกลุ่มกรวยโคแอกเชียลโดยมีลำแสงตกกระทบบนแกน ภาพของพวกเขาบนฟิล์มถ่ายภาพ (debyegram) มีรูปแบบของวงแหวนศูนย์กลาง ตำแหน่งและความเข้มของแสงซึ่งช่วยให้สามารถตัดสินองค์ประกอบของสารที่กำลังศึกษาได้
วิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์
เนื้อเยื่อบางชนิดสามารถแบ่งออกเป็นเซลล์แต่ละเซลล์เพื่อให้เซลล์ยังมีชีวิตอยู่และมักจะสามารถสืบพันธุ์ได้ ข้อเท็จจริงนี้ยืนยันแนวคิดของเซลล์ในฐานะหน่วยสิ่งมีชีวิตได้อย่างชัดเจน ฟองน้ำซึ่งเป็นสิ่งมีชีวิตหลายเซลล์ดึกดำบรรพ์สามารถแยกออกเป็นเซลล์ได้โดยการถูผ่านตะแกรง หลังจากนั้นครู่หนึ่ง เซลล์เหล่านี้จะเชื่อมต่อกันใหม่และก่อตัวเป็นฟองน้ำ เนื้อเยื่อของตัวอ่อนของสัตว์สามารถแยกออกจากกันได้โดยใช้เอนไซม์หรือวิธีอื่นที่ทำให้พันธะระหว่างเซลล์อ่อนลง
นักเพาะพันธุ์ตัวอ่อนชาวอเมริกัน R. Garrison (พ.ศ. 2422-2502) เป็นคนแรกที่แสดงให้เห็นว่าตัวอ่อนและแม้แต่เซลล์ที่โตเต็มวัยบางเซลล์สามารถเติบโตและขยายพันธุ์ภายนอกร่างกายได้ในสภาพแวดล้อมที่เหมาะสม เทคนิคนี้เรียกว่าการเพาะเลี้ยงเซลล์ ได้รับการพัฒนาให้สมบูรณ์แบบโดยนักชีววิทยาชาวฝรั่งเศส เอ. คาร์เรล (พ.ศ. 2416-2502) เซลล์พืชสามารถเจริญเติบโตได้ในการเพาะเลี้ยง แต่เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์สัตว์ เซลล์เหล่านี้จะรวมตัวกันเป็นกระจุกที่ใหญ่กว่าและเกาะติดกันแน่นมากกว่า ดังนั้นเนื้อเยื่อจึงถูกสร้างขึ้นเมื่อการเพาะเลี้ยงเติบโตขึ้น แทนที่จะเป็นแต่ละเซลล์ ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ พืชที่โตเต็มวัยทั้งหมด เช่น แครอท สามารถปลูกได้จากเซลล์เดียว
วิธีไมโครฟิก
การใช้ไมโครแมนิปูเลเตอร์ทำให้แต่ละส่วนของเซลล์สามารถถอดออก เพิ่ม หรือแก้ไขได้ด้วยวิธีใดวิธีหนึ่ง เซลล์อะมีบาขนาดใหญ่สามารถแบ่งออกเป็นองค์ประกอบหลักได้สามส่วน ได้แก่ เยื่อหุ้มเซลล์ ไซโตพลาสซึม และนิวเคลียส จากนั้นส่วนประกอบเหล่านี้สามารถประกอบกลับเป็นเซลล์ที่มีชีวิตได้ ด้วยวิธีนี้สามารถรับเซลล์เทียมที่ประกอบด้วยส่วนประกอบของอะมีบาประเภทต่างๆ
หากเราคำนึงว่าดูเหมือนว่าจะเป็นไปได้ที่จะสังเคราะห์ส่วนประกอบของเซลล์บางอย่างเทียมได้ การทดลองในการประกอบเซลล์เทียมอาจเป็นก้าวแรกสู่การสร้างรูปแบบชีวิตใหม่ในห้องปฏิบัติการ เนื่องจากสิ่งมีชีวิตแต่ละชนิดพัฒนาจากเซลล์เดียว วิธีการผลิตเซลล์เทียมโดยหลักการช่วยให้สามารถสร้างสิ่งมีชีวิตประเภทที่กำหนดได้ หากในเวลาเดียวกันใช้ส่วนประกอบที่แตกต่างจากที่พบในเซลล์ที่มีอยู่เล็กน้อย อย่างไรก็ตาม ในความเป็นจริง ไม่จำเป็นต้องมีการสังเคราะห์ส่วนประกอบของเซลล์ทั้งหมดโดยสมบูรณ์ โครงสร้างส่วนประกอบส่วนใหญ่ของเซลล์ (หรือทั้งหมด) ถูกกำหนดโดยกรดนิวคลีอิก ดังนั้นปัญหาในการสร้างสิ่งมีชีวิตใหม่จึงอยู่ที่การสังเคราะห์กรดนิวคลีอิกชนิดใหม่และการแทนที่กรดนิวคลีอิกตามธรรมชาติในเซลล์บางเซลล์
วิธีการฟิวชั่นเซลล์
เซลล์เทียมอีกประเภทหนึ่งสามารถรับได้โดยการหลอมรวมเซลล์ที่มีสายพันธุ์เดียวกันหรือต่างกัน เพื่อให้เกิดการหลอมรวม เซลล์จะถูกสัมผัสกับเอนไซม์ของไวรัส ในกรณีนี้ พื้นผิวด้านนอกของทั้งสองเซลล์จะติดกาวเข้าด้วยกัน และเยื่อหุ้มเซลล์ที่อยู่ระหว่างเซลล์เหล่านี้จะถูกทำลาย และเซลล์จะถูกสร้างขึ้นโดยมีโครโมโซมสองชุดล้อมรอบอยู่ในนิวเคลียสเดียว เป็นไปได้ที่จะหลอมเซลล์ประเภทต่าง ๆ หรือในขั้นตอนการแบ่งที่ต่างกัน เมื่อใช้วิธีการนี้ เป็นไปได้ที่จะได้เซลล์ลูกผสมระหว่างหนูกับไก่ มนุษย์กับหนู และมนุษย์กับคางคก เซลล์ดังกล่าวเป็นแบบลูกผสมในช่วงแรกเท่านั้น และหลังจากการแบ่งเซลล์หลายครั้ง เซลล์เหล่านี้จะสูญเสียโครโมโซมส่วนใหญ่ไปเป็นประเภทใดประเภทหนึ่ง ตัวอย่างเช่น ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายจะกลายเป็นเซลล์ของเมาส์ที่ไม่มียีนของมนุษย์หรือมีเพียงร่องรอยเล็กน้อยเท่านั้น สิ่งที่น่าสนใจเป็นพิเศษคือการหลอมรวมของเซลล์ปกติและเซลล์มะเร็ง ในบางกรณี ลูกผสมกลายเป็นเนื้อร้าย ในบางกรณีก็ไม่เป็นเช่นนั้น เช่น คุณสมบัติทั้งสองสามารถแสดงตนออกมาได้ทั้งแบบเด่นและแบบถอย ผลลัพธ์นี้ไม่ใช่เรื่องที่คาดไม่ถึง เนื่องจากมะเร็งอาจเกิดจากปัจจัยต่างๆ และมีกลไกที่ซับซ้อน
แสงกล้องจุลทรรศน์เซลล์
ภาคผนวก 1
รูปที่ 2 Cryotome รูปที่ 3 กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส
รูปที่ 4 กล้องจุลทรรศน์รบกวน
โพสต์บน Allbest.ru
...เอกสารที่คล้ายกัน
ศึกษาโครงสร้างและหลักการทำงานของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงและอิเล็กตรอน การพิจารณาเทคนิคสนามมืดและสนามสว่าง กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส การรบกวนและโพลาไรเซชัน การศึกษาเซลล์คงตัวที่สำคัญ ความรู้พื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
การบรรยายเพิ่มเมื่อ 16/05/2014
กล้องจุลทรรศน์อุโมงค์สแกน, การใช้งาน หลักการทำงานของกล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม การศึกษาวัตถุทางชีววิทยา - โมเลกุลขนาดใหญ่ (รวมถึงโมเลกุล DNA) ไวรัสและโครงสร้างทางชีววิทยาอื่น ๆ โดยใช้กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม
งานหลักสูตรเพิ่มเมื่อ 28/04/2014
แนวคิดของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนเป็นชุดวิธีในการศึกษาโครงสร้างจุลภาคของร่างกายและองค์ประกอบในท้องถิ่นโดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน เนื้อหาของหลักการทางโทรทัศน์ในการสแกนลำแสงอิเล็กตรอนหรือไอออนบางๆ บนพื้นผิวของตัวอย่าง
การนำเสนอเพิ่มเมื่อ 22/08/2558
การวัดขนาดของวัตถุขนาดเล็ก วิธีคอนทราสต์เฟส แนวคิดเรื่องเลนส์อิเล็กตรอน การสร้างกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน การทดลองเกี่ยวกับการเลี้ยวเบนของอิเล็กตรอน การวิจัยโครงสร้างเรขาคณิตพื้นผิวของเซลล์ ไวรัส และวัตถุขนาดเล็กอื่นๆ
การนำเสนอเพิ่มเมื่อ 05/12/2017
วิธีการวิจัยด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน พื้นฐานทางกายภาพของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด โครงร่างของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด วัตถุประสงค์ของส่วนประกอบและการทำงานของกล้องจุลทรรศน์ การเตรียมวัตถุเพื่อการวิจัยและข้อกำหนดพิเศษสำหรับวัตถุเหล่านั้น
งานหลักสูตร เพิ่มเมื่อ 05/04/2011
ช่วงสเปกตรัมแสง รากฐานทางทฤษฎีของวิธี NDT แบบออปติคัล การสั่นสะเทือนแสง การจำแนกประเภทของวิธี NDT แบบออปติคัล สเปกตรัมการปล่อยก๊าซและของเหลวแบบไม่ต่อเนื่อง สเปกตรัมต่อเนื่องของการแผ่รังสีภายในของของแข็งที่มีอุณหภูมิต่างกัน
บทคัดย่อเพิ่มเมื่อ 15/01/2552
ลักษณะทั่วไปของวิธีการที่ใช้ในการวัดพารามิเตอร์ของเส้นเลือดฝอยของแม่พิมพ์: อินเทอร์เฟอโรเมทรีโฮโลแกรม ออพติคฟูริเยร์ กล้องจุลทรรศน์ การวิเคราะห์เปรียบเทียบวิธีการพิจารณา การกำหนดข้อดีและข้อเสียหลัก
ทดสอบเพิ่มเมื่อ 20/05/2013
การสร้างกล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม หลักการทำงาน ข้อดีและข้อเสีย วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม ความสามารถทางเทคนิคของกล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม การใช้กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอมเพื่ออธิบายการเปลี่ยนรูปของฟิล์มโพลีเมอร์
งานหลักสูตร เพิ่มเมื่อ 11/14/2012
ประวัติความเป็นมาของกล้องจุลทรรศน์ - อุปกรณ์สำหรับรับภาพขยายของวัตถุที่มองไม่เห็นด้วยตาเปล่า วิธีการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง หลักการทำงานและโครงสร้างของกล้องจุลทรรศน์โลหะวิทยา วิธีการตรวจสอบโลหะด้วยกล้องจุลทรรศน์
บทคัดย่อเพิ่มเมื่อ 06/10/2552
พื้นฐานของกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด คุณลักษณะทางระเบียบวิธีของการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนของโลหะหลอม คุณสมบัติของกล้องจุลทรรศน์ที่ออกแบบมาเพื่อศึกษาโครงสร้างของชั้นผิวของโลหะหลอม
จ. กล้องจุลทรรศน์สนามมืด
18. กล้องจุลทรรศน์ประกอบด้วยชิ้นส่วนทางแสงและทางกล ชิ้นส่วนออปติกคืออะไร?
ก. ท่อ, เลนส์ใกล้ตา, คอนเดนเซอร์
B. Revolver, มาโคร- และไมโครสกรู, กระจกเงา
C. ปืนพกลูกโม่, เลนส์ใกล้ตา
D. เลนส์ใกล้ตา, คอนเดนเซอร์, วัตถุประสงค์
E. หลอด, เลนส์ใกล้ตา, ปืนพก
19. เมื่อใช้รังสีอัลตราไวโอเลตเป็นแหล่งกำเนิดแสง ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์จะเพิ่มขึ้น อุปกรณ์กล้องจุลทรรศน์ใดใช้แหล่งกำเนิดแสงนี้
ก. สนามมืดและแสงเรืองแสง
B. แสงเรืองแสง, อัลตราไวโอเลต
ส.แสงและอิเล็กทรอนิกส์
คอนทราสต์ D.Phase, อัลตราไวโอเลต
E. โพลาไรซ์, อัลตราไวโอเลต
20. กล้องจุลทรรศน์ประกอบด้วยชิ้นส่วนทางกลและทางแสง ส่วนใดของกล้องจุลทรรศน์ที่มีไดอะแฟรม
ก. เลนส์ใกล้ตาและวัตถุประสงค์
B. ช่องมองภาพและคอนเดนเซอร์
C. ท่อและช่องมองภาพ
ง. เลนส์และคอนเดนเซอร์
E. หลอด เลนส์ เลนส์ใกล้ตา
21. การทดลองนี้ใช้วัตถุที่มีชีวิตซึ่งจำเป็นต้องระบุองค์ประกอบทางเคมีจำนวนหนึ่งโดยใช้การสังเกตที่สำคัญ จะใช้วิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใด?
ก. กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส
ข. กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
ค. กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
E กล้องจุลทรรศน์สนามมืด
22. สำหรับการตรวจเนื้อเยื่อของเซลล์ จะใช้สารเรืองแสง ในกรณีนี้ใช้กล้องจุลทรรศน์ชนิดใด
ก. กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
ข. กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน
ค. กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
ง. กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน
จ. กล้องจุลทรรศน์สนามมืด
23. ผู้วิจัยได้รับมอบหมายให้ทำความเข้าใจเชิงพื้นที่เกี่ยวกับโครงสร้างของวัตถุที่กำลังศึกษา ผู้เชี่ยวชาญจะทำงานร่วมกับเครื่องมือกล้องจุลทรรศน์ชนิดใด
ก. กล้องจุลทรรศน์อัลตราไวโอเลต
B. กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส
ค. กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน
ง. กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด
E. กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน
24. ใช้หลอดปรอทควอทซ์เป็นแหล่งกำเนิดแสง กล้องจุลทรรศน์ที่มีแหล่งกำเนิดแสงนี้มีความละเอียดเท่าใด
25. ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์ขึ้นอยู่กับความยาวคลื่นของแหล่งกำเนิดแสง กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงมีกำลังในการแยกรายละเอียดเท่าใด
26. ก่อนที่จะเริ่มการตรวจสอบตัวอย่างเนื้อเยื่อวิทยา จำเป็นต้องให้แสงสว่างในขอบเขตการมองเห็นอย่างสม่ำเสมอ กล้องจุลทรรศน์ใช้ส่วนใดบ้าง?
A. ไมโครและแมคโครวิต
บีคอนเดนเซอร์และกระจก
C. ท่อและที่ยึดท่อ
D. ท่อและช่องมองภาพ
27. ผู้วิจัยได้รับมอบหมายให้ศึกษาโครงสร้างอัลตราสโคปของพลาสมาเลมมาของเม็ดเลือดแดง จะใช้เครื่องมือกล้องจุลทรรศน์อะไร?
อ. สเวโตวา
B. คอนทราสต์เฟส
ค. อิเล็กทรอนิกส์
D. โพลาไรซ์
จ. อัลตราไวโอเลต
28. เมื่อศึกษาเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อโครงร่างจำเป็นต้องกำหนดโครงสร้างไอโซและแอนไอโซโทรปิกของเนื้อเยื่อ จะใช้กล้องจุลทรรศน์ชนิดใด?
อ. สเวโตวา
B. คอนทราสต์เฟส
ค. อิเล็กทรอนิกส์
D. โพลาไรซ์
E. อัลตร้าไมโครสโคป
29. ความละเอียดของกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ขึ้นอยู่กับความยาวคลื่นของแหล่งกำเนิดแสง มันเท่ากับอะไร?
ก. 0.1 ไมโครเมตร C. 0.4 ไมโครเมตร
ข. 0.2 ไมโครเมตร ง. 0.1 นาโนเมตร
30. ในห้องปฏิบัติการทางคลินิก จะใช้การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์เพื่อศึกษาจำนวนเม็ดเลือดทั้งหมด ต้องใช้กล้องจุลทรรศน์อะไรในการนี้?
อ. สเวโทวอย
B. คอนทราสต์เฟส
ส.อิเล็กทรอนิกส์
D. โพลาไรซ์
จ. อัลตราไวโอเลต
31. นำเสนอวัตถุมีชีวิตที่มีการเรืองแสงตามธรรมชาติเพื่อการวิจัย การศึกษานี้ควรใช้กล้องจุลทรรศน์ชนิดใด
อ. สเวโตวา
B. คอนทราสต์เฟส
ค. อิเล็กทรอนิกส์
D. โพลาไรซ์
จ. อัลตราไวโอเลต
32. จากการตรวจชิ้นเนื้อ ทำให้ได้วัสดุเซลล์เนื้องอก มีความจำเป็นต้องศึกษาโครงสร้างอัลตราไมโครสโคป การศึกษานี้ใช้กล้องจุลทรรศน์ชนิดใด
อ. สเวโตวา
B. คอนทราสต์เฟส
ค. อิเล็กทรอนิกส์
D. โพลาไรซ์
จ. อัลตราไวโอเลต
หัวข้อ 2: เทคนิคทางประวัติศาสตร์
หลักการพื้นฐานของการเตรียมการเตรียมกล้องจุลทรรศน์แสงและกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน การนำวัสดุ (การตัดชิ้นเนื้อ การตัดชิ้นเนื้อด้วยเข็มเจาะ การชันสูตรพลิกศพ) การตรึง การขาดน้ำ การบดอัดวัตถุ การเตรียมส่วนต่างๆ บนไมโครโทมและอัลตราไมโครโตม ประเภทของการเตรียมไมโคร - ส่วน, สเมียร์, รอยพิมพ์, ฟิล์ม, ส่วนบาง การเตรียมการย้อมสีและการตัดกัน แนวคิดเรื่องสีย้อมเนื้อเยื่อ
เทคนิคการใช้กล้องจุลทรรศน์
ขั้นตอนหลักของการวิเคราะห์ทางเซลล์วิทยาและเนื้อเยื่อวิทยา:
การเลือกวัตถุวิจัย
การเตรียมการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์
การประยุกต์วิธีการทางจุลทรรศน์
การวิเคราะห์เชิงคุณภาพและเชิงปริมาณของภาพที่ได้มา
วิธีการที่ใช้ในเทคโนโลยีทางเนื้อเยื่อวิทยา:
1. อายุการใช้งาน.
2. มรณกรรม
ฉันใช้วิธีการเชิญ
วัตถุประสงค์ของการวิจัยทางหลอดเลือดดำคือการได้รับข้อมูลเกี่ยวกับชีวิตของเซลล์: การเคลื่อนไหว, การแบ่งตัว, การเจริญเติบโต, การสร้างความแตกต่าง, ปฏิสัมพันธ์ของเซลล์, อายุขัย, การทำลาย, การเปลี่ยนแปลงปฏิกิริยาภายใต้อิทธิพลของปัจจัยต่างๆ
การศึกษาเซลล์และเนื้อเยื่อของสิ่งมีชีวิตสามารถทำได้ภายนอกร่างกาย (ในหลอดทดลอง) หรือภายในร่างกาย (ในสิ่งมีชีวิต)
ก. การศึกษาเซลล์และเนื้อเยื่อของสิ่งมีชีวิตในการเพาะเลี้ยง (ในหลอดทดลอง) –
วิธีการเพาะปลูก
มี: ก) วัฒนธรรมแขวนลอย (เซลล์แขวนลอยในตัวกลางที่เป็นสารอาหาร) ข) เนื้อเยื่อ ค) อวัยวะ ง) ชั้นเดียว
วิธีการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อภายนอกร่างกายเป็นวิธีที่พบได้บ่อยที่สุด สามารถปลูกเนื้อเยื่อได้ในห้องที่ปิดผนึกอย่างผนึกแน่นแบบโปร่งใสเป็นพิเศษ ภายใต้สภาวะปลอดเชื้อ จะมีการหยดสารอาหารลงในห้องเพาะเลี้ยง สารอาหารที่ดีที่สุดคือพลาสมาในเลือดซึ่งมีการเติมสารสกัดจากตัวอ่อนลงไป (สารสกัดจากเนื้อเยื่อของตัวอ่อนที่มีสารกระตุ้นการเจริญเติบโตจำนวนมาก) วางชิ้นส่วนของอวัยวะหรือเนื้อเยื่อ (ไม่เกิน 1 mm3) ที่ต้องทำการเพาะเลี้ยงไว้ที่นั่นด้วย
ควรรักษาเนื้อเยื่อเพาะเลี้ยงไว้ที่อุณหภูมิร่างกายของสิ่งมีชีวิตที่นำเนื้อเยื่อไปวิจัย เนื่องจากสารอาหารจะใช้งานไม่ได้อย่างรวดเร็ว (ผลิตภัณฑ์ที่สลายตัวซึ่งปล่อยออกมาจากเนื้อเยื่อเพาะเลี้ยงจะสะสมอยู่ในนั้น) จึงจำเป็นต้องเปลี่ยนทุกๆ 3-5 วัน
การใช้วิธีการเพาะเลี้ยงทำให้สามารถระบุรูปแบบของความแตกต่าง การเสื่อมของเซลล์ที่เป็นมะเร็ง ปฏิกิริยาระหว่างเซลล์ระหว่างกัน ตลอดจนไวรัสและจุลินทรีย์ การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของตัวอ่อนทำให้สามารถศึกษาพัฒนาการของกระดูก กระดูกอ่อน ผิวหนัง ฯลฯ
วิธีการเพาะปลูกมีความสำคัญเป็นพิเศษสำหรับการสังเกตการทดลองเกี่ยวกับเซลล์และเนื้อเยื่อของมนุษย์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการระบุเพศ ความเสื่อมของมะเร็ง โรคทางพันธุกรรม ฯลฯ
ข้อเสียของวิธีการ:
1. ข้อเสียเปรียบหลักของวิธีนี้คือ ตรวจเนื้อเยื่อหรืออวัยวะแยกออกจากร่างกาย หากไม่ได้รับอิทธิพลจากระบบประสาทของร่างกาย ร่างกายจะสูญเสียความแตกต่างโดยธรรมชาติ
2. ความจำเป็นในการปลูกถ่ายบ่อยครั้ง (พร้อมการเพาะปลูกระยะยาว)
3. ดัชนีการหักเหของแสงที่เหมือนกันของเนื้อเยื่อ
ข้อมูลที่เกี่ยวข้อง.
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์- หนึ่งในวิธีการวิจัยทางสัณฐานวิทยาที่มีประสิทธิภาพสูงซึ่งมีความสามารถในการระบุโครงสร้างทางชีววิทยาอย่างกว้างขวางซึ่งเมื่อรวมกับการเข้าถึงและความเรียบง่ายสัมพัทธ์จะกำหนดมูลค่าที่สูง วิธีการนี้ทำให้สามารถศึกษาได้ไม่เพียง แต่โครงสร้างทางเนื้อเยื่อวิทยาของยาเท่านั้น แต่ยังรวมถึงพารามิเตอร์ทางจุลพยาธิวิทยาด้วย ในช่วงทศวรรษที่ 40 และ 50 ของศตวรรษที่ XX กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันถือเป็นวิธีการเชิงโครงสร้างพิเศษ เนื่องจากทำให้สามารถมองเห็นความสามารถเชิงโครงสร้างพิเศษของเนื้อเยื่อได้
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันได้รับการออกแบบมาเพื่อศึกษาคุณสมบัติของโครงสร้างเนื้อเยื่อวิทยาที่มีความสามารถในการไบรีฟรินเจนซ์ (แอนไอโซโทรปี) - การแยกลำแสงเมื่อผ่านตัวกลางแอนไอโซทรอปิก คลื่นแสงในตัวกลางแบบแอนไอโซทรอปิกจะแตกตัวออกเป็นสองคลื่นโดยมีระนาบการสั่นของคลื่นแม่เหล็กไฟฟ้าตั้งฉากกัน ระนาบเหล่านี้เรียกว่าระนาบโพลาไรเซชัน แสงโพลาไรซ์แตกต่างจากแสงธรรมดา (ไม่โพลาไรซ์) ตรงที่คลื่นแสงจะสั่นในระนาบต่างๆ ในขณะที่แสงโพลาไรซ์จะเกิดขึ้นในระนาบหนึ่งเท่านั้น
ในการสร้างเอฟเฟกต์โพลาไรซ์ กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์จะใช้โพลารอยด์สองตัว ชิ้นแรกเรียกว่าโพลาไรเซอร์วางอยู่ระหว่างตัวส่องกล้องจุลทรรศน์กับตัวอย่างเนื้อเยื่อ โพลารอยด์ตัวที่สองซึ่งอยู่ระหว่างชิ้นตัวอย่างเนื้อเยื่อวิทยากับตาของผู้วิจัยคือเครื่องวิเคราะห์ ทั้งโพลาไรเซอร์และเครื่องวิเคราะห์ต่างก็มีฟิลเตอร์โพลาไรซ์เหมือนกันทุกประการ ดังนั้นจึงสามารถเปลี่ยนได้ (หากการออกแบบกล้องจุลทรรศน์อนุญาต) ก่อนหน้านี้ ปริซึม Nicolas, Arens หรือ Thomson ที่ทำจากสปาร์ไอซ์แลนด์ถูกนำมาใช้สำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน ปริซึมเหล่านี้มีมุมการหักเหของแสงที่จำกัด ในปัจจุบัน แทนที่จะใช้ฟิลเตอร์โพลาไรซ์แบบแบน ทำให้เกิดแสงโพลาไรซ์สนามกว้าง
ในการสร้างแสงโพลาไรซ์ ตำแหน่งที่สัมพันธ์กันของโพลาไรเซอร์และเครื่องวิเคราะห์จะมีบทบาทในการกำหนดโดยสัมพันธ์กับแกนแสงของกล้องจุลทรรศน์ หากพวกมันถูกวางตัวในลักษณะที่ทั้งคู่ส่งแสงโพลาไรซ์ไปในระนาบเดียวกันนั่นคือ เมื่อระนาบโพลาไรซ์ตรงกัน ฟิลเตอร์โพลาไรซ์ทั้งสองตัวสามารถส่งแสงโพลาไรซ์ได้ มุมมองของกล้องจุลทรรศน์มีความสว่าง (รูปที่ 1a)
ข้าว. 1 ตัวอย่างปอดมนุษย์ของ Brightfield, OlympusCX41, เลนส์ 10 เท่า
หากระนาบโพลาไรซ์ของฟิลเตอร์โพลาไรซ์ตั้งฉากกัน (ทำได้โดยการหมุนเครื่องวิเคราะห์ 90° รอบแกนแสงของกล้องจุลทรรศน์) แสงโพลาไรซ์จะไม่ผ่านเข้าไปและผู้วิจัยจะมองเห็นขอบเขตการมองเห็นที่มืด (รูปที่. 2).
เมื่อโพลาไรเซอร์หมุน 360° ในขณะที่หมุน มุมมองจะมืดลงอย่างสมบูรณ์สองครั้งและเพิ่มความสว่างอย่างสมบูรณ์สองครั้ง ในอดีต มีการใช้ฟิลเตอร์ Bernauer แบบชดเชย ซึ่งสร้างโทนสีแดงให้กับขอบเขตการมองเห็นที่มืด ( U-TP530 ). เมื่อใช้ฟิลเตอร์กระจกสีดำ ขอบเขตการมองเห็นที่มืดจะไม่ปรากฏมืดสนิท แต่จะสว่างเล็กน้อย
รูปที่ 2 ตัวอย่างปอดของมนุษย์ในแสงโพลาไรซ์ วัตถุประสงค์ 10 เท่า
ในกรณีที่ตำแหน่งกากบาทของฟิลเตอร์โพลาไรซ์ (เช่น ในการตรวจออร์โธสโคป) สารแอนไอโซโทรปิกที่มีอยู่ในตัวอย่างเนื้อเยื่อวิทยาถูกพบในเส้นทางของแสงโพลาไรซ์ สารเหล่านี้จะแยกแสงโพลาไรซ์ออกเป็นสองลำโดยมีระนาบการสั่นของแสงตั้งฉากซึ่งกันและกัน คลื่น รังสีของแสงที่มีระนาบการสั่นสะเทือนตรงกับระนาบโพลาไรเซชันที่ผ่านเครื่องวิเคราะห์ และรังสีที่มีระนาบตั้งฉากจะถูกตัดออก ส่งผลให้ความเข้มของฟลักซ์แสงที่เข้าสู่ดวงตาของนักวิจัยและเข้าสู่กล้องมีเพียงครึ่งหนึ่ง ความเข้มของลำแสงเดิม จากกระบวนการที่อธิบายไว้ สารแอนไอโซโทรปิกที่อยู่ระหว่างโพลาไรเซอร์แบบไขว้สองตัวจะมองเห็นได้บนพื้นหลังสีเข้มในรูปแบบของวัตถุเรืองแสง ในเวลาเดียวกัน โครงสร้างไอโซโทรปิกที่ไม่มีความสามารถในการรีฟริงเจนซ์จะยังคงมืดอยู่
สิ่งนี้ยังส่งผลต่อการเลือกด้วย กล้องสำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์. เนื่องจากงานคือการจับสัญญาณสว่างเล็กๆ บนพื้นหลังที่มืด โดยปกติแล้วกล้องสำหรับกล้องจุลทรรศน์สนามสว่างอาจไม่เพียงพอเนื่องจากความไวของกล้องต่ำและเสียงรบกวนจำนวนมากที่เกิดขึ้นระหว่างการบันทึก สำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ จำเป็นต้องใช้กล้องไมโครสโคปที่มีความไวสูงและการสร้างสีที่แม่นยำ. ควรใช้กล้องที่ใช้เมทริกซ์ CCD (, VZ-CC50S) อย่างไรก็ตาม ในปัจจุบัน คุณยังสามารถใช้กล้องรุ่นราคาประหยัดที่ใช้เมทริกซ์ CMOS ของ Sony IMX ซีรีส์ () ได้
เนื้อเยื่อชีวภาพมีโครงสร้างแอนไอโซโทรปิกในจำนวนที่เพียงพอ: องค์ประกอบของอุปกรณ์หดตัวของกล้ามเนื้อ, อะไมลอยด์, กรดยูริก, การก่อตัวของคอลลาเจน, ไขมันบางส่วน, ผลึกจำนวนหนึ่ง ฯลฯ
รังสีของแสงที่แยกออกเป็นวัตถุแอนไอโซโทรปิกและผ่านเครื่องวิเคราะห์มีลักษณะเฉพาะด้วยความเร็วการแพร่กระจายคลื่นไม่เท่ากัน ขึ้นอยู่กับขนาดของความแตกต่างนี้ (เรียกอีกอย่างว่า ค่าหน่วงเวลาของลำแสง) และเนื่องจากความแตกต่างในการดูดกลืนแสงในตัววิเคราะห์ การเรืองแสงของวัตถุแอนไอโซโทรปิกอาจเป็นสีขาวหรือสีก็ได้ ในกรณีหลังนี้เรากำลังพูดถึงปรากฏการณ์ของการแบ่งแยก ( การดูดซึมสองเท่าฉัน). เมื่อศึกษาในสนามโพลาไรซ์ เอฟเฟกต์สีจะถูกสร้างขึ้น เช่น จากคริสตัลจำนวนมาก
กระบวนการไบรีฟริงเจนซ์สามารถเพิ่มประสิทธิภาพได้ด้วยการใช้สีย้อมบางชนิด ซึ่งเป็นโมเลกุลที่มีความสามารถในการสะสมตัวในโครงสร้างแบบแอนไอโซโทรปิก ปฏิกิริยาฮิสโตเคมีที่ส่งผลให้เกิดแอนไอโซโทรปีเรียกว่าปฏิกิริยาโทโปออปติก (G. Romhanyi) ปฏิกิริยาดังกล่าวมีสองประเภท - การเติมและการผกผัน ด้วยปฏิกิริยาเพิ่มเติม ความล่าช้าของลำแสงจะเพิ่มขึ้นซึ่งเรียกว่า anisotropy เชิงบวก เมื่อปฏิกิริยาผกผันจะลดลง - anisotropy เชิงลบ
ฮาร์ดแวร์และอุปกรณ์
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันดำเนินการโดยใช้กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์แบบพิเศษ ตัวอย่างเช่น เราสามารถตั้งชื่อกล้องจุลทรรศน์ที่นำเข้าได้ กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงที่ทันสมัยส่วนใหญ่มีอุปกรณ์เสริมสำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน
กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงในห้องปฏิบัติการหรือการวิจัยใดๆ ก็สามารถนำไปใช้กับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันได้ ก็เพียงพอแล้วที่จะมีตัวกรองโพลาไรซ์สองตัว โดยตัวกรองหนึ่งทำหน้าที่เป็นโพลาไรเซอร์ระหว่างแหล่งกำเนิดแสงกับชิ้นงาน และอีกตัวกรองหนึ่งซึ่งทำหน้าที่เป็นเครื่องวิเคราะห์ วางอยู่ระหว่างชิ้นงานทดสอบกับดวงตาของนักวิจัย โพลาไรเซอร์สามารถติดตั้งไว้ในคอนเดนเซอร์หรือวางไว้ใต้คอนเดนเซอร์เหนือไดอะแฟรมสนาม และเครื่องวิเคราะห์สามารถวางในช่องในปืนลูกโม่หรือในส่วนแทรกตรงกลางได้
ในรูป รูปที่ 3 แสดงแผนผังของกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ นอกเหนือจากส่วนประกอบทั่วไปในกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั้งหมดแล้ว กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ยังมีฟิลเตอร์โพลาไรซ์สองตัว (โพลาไรเซอร์ซึ่งโดยปกติจะอยู่ใต้คอนเดนเซอร์ และเครื่องวิเคราะห์ที่อยู่ในช่องมองภาพ) รวมถึงตัวชดเชย เครื่องวิเคราะห์จะต้องหมุน และต้องใช้สเกลไล่ระดับที่เหมาะสมเพื่อกำหนดระดับการหมุน
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ใช้แหล่งกำเนิดแสงที่ให้ลำแสงที่มีความหนาแน่นสูง ขอแนะนำให้ใช้หลอดไฟ 100 W ที่แรงดันไฟฟ้า 12 V เป็นแหล่งกำเนิด สำหรับการวิจัยบางประเภทจำเป็นต้องใช้แสงสีเดียว เพื่อจุดประสงค์นี้ มีการใช้ตัวกรองสัญญาณรบกวนโลหะ ซึ่งวางไว้เหนือกระจกได้ดีที่สุด กระจกฝ้าที่มีการกระเจิงแสงวางอยู่ด้านหน้าโพลาไรเซอร์ เช่น ระหว่างมันกับแหล่งกำเนิดแสง แต่ไม่ว่าในกรณีใดหลังจากโพลาไรเซอร์ เนื่องจากจะทำให้การทำงานของฟิลเตอร์โพลาไรซ์หยุดชะงัก
ในอดีต วัตถุประสงค์ไม่มีสีที่ไม่มีแรงตึงภายในถูกนำมาใช้สำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน แต่ปัจจุบันพบได้ยาก ทุกวันนี้ กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์จะใช้เฉพาะวัตถุประสงค์ที่ไม่มีสีซึ่งไม่มีความตึงเครียดภายในเท่านั้น เลนส์ Apochromatic สามารถใช้ได้เฉพาะในกรณีที่ต้องใช้การแสดงสีตามปกติระหว่างการถ่ายภาพไมโคร
กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์มีแท่นหมุนซึ่งสามารถเปลี่ยนตำแหน่งที่สัมพันธ์กับแกนลำแสงได้ มุมการหมุนของโต๊ะวัดโดยใช้สเกลองศาที่ทำเครื่องหมายไว้ตามเส้นรอบวง ข้อกำหนดเบื้องต้นประการหนึ่งสำหรับการใช้กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันอย่างมีประสิทธิภาพคือการจัดตำแหน่งแท่นหมุนอย่างระมัดระวังโดยใช้สกรูยึดตรงกลาง
องค์ประกอบที่สำคัญของกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์คือตัวชดเชยที่วางอยู่ระหว่างวัตถุประสงค์และเครื่องวิเคราะห์ ซึ่งมักจะอยู่ในหลอดกล้องจุลทรรศน์ ตัวชดเชยคือแผ่นที่ทำจากยิปซั่มควอตซ์หรือไมกาชนิดพิเศษ ช่วยให้คุณสามารถวัดความแตกต่างในเส้นทางของรังสีแยกซึ่งมีหน่วยเป็นนาโนเมตร การทำงานของตัวชดเชยนั้นมั่นใจได้ด้วยความสามารถในการเปลี่ยนความแตกต่างในเส้นทางของรังสีแสงโดยลดลงเหลือศูนย์หรือเพิ่มขึ้นเป็นค่าสูงสุด ซึ่งทำได้โดยการหมุนตัวชดเชยรอบแกนลำแสง
เทคนิคการใช้กล้องจุลทรรศน์ในแสงโพลาไรซ์
สะดวกกว่าในการทำกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันในห้องมืดเนื่องจากความเข้มของฟลักซ์แสงที่เข้าสู่ดวงตาของนักวิจัยจะลดลง 2 เท่าเมื่อเทียบกับของเดิม หลังจากเปิดไฟส่องสว่างของกล้องจุลทรรศน์ ขั้นแรกให้ได้รับแสงสว่างที่สว่างที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ในขอบเขตการมองเห็นโดยการหมุนโพลาไรเซอร์หรือเครื่องวิเคราะห์ ตำแหน่งของฟิลเตอร์โพลาไรเซชันนี้สอดคล้องกับความบังเอิญของระนาบโพลาไรซ์ วางยาไว้บนเวทีและศึกษาในที่สว่างก่อน จากนั้น เมื่อหมุนโพลาไรเซอร์ (หรือเครื่องวิเคราะห์) มุมมองจะมืดลงมากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ ตำแหน่งตัวกรองนี้สอดคล้องกับการจัดเรียงตั้งฉากของระนาบโพลาไรซ์ เพื่อที่จะเปิดเผยผลกระทบของแอนไอโซโทรปี จำเป็นต้องรวมระนาบโพลาไรซ์ของวัตถุแอนไอโซโทรปิกเข้ากับระนาบของแสงโพลาไรซ์ ในทางปฏิบัติแล้ว สามารถทำได้โดยการหมุนระยะวัตถุรอบแกนลำแสง หากใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงที่ไม่ได้ติดตั้งแท่นหมุนสำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน จะต้องหมุนตัวอย่างเนื้อเยื่อวิทยาด้วยตนเอง สิ่งนี้เป็นที่ยอมรับ แต่ในกรณีนี้ มันเป็นไปไม่ได้ที่จะทำกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันบางประเภทที่ต้องมีการประเมินเชิงปริมาณ (การกำหนดสัญญาณของการหักเหของแสง ขนาดของความแตกต่างในเส้นทางของรังสีแสง)
หากวัตถุแอนไอโซทรอปิกในชิ้นงานทดสอบถูกจัดเรียงอย่างเป็นระเบียบ (เช่น แผ่นแอนไอโซทรอปิกของเส้นใยกล้ามเนื้อโครงร่าง) จะสะดวกที่จะศึกษาวัตถุเหล่านี้ในตำแหน่งคงที่ของเวที ซึ่งวัตถุเหล่านี้ให้การเรืองแสงสูงสุดบนพื้นหลังที่มืด . หากโครงสร้างแอนไอโซทรอปิกตั้งอยู่อย่างวุ่นวายในการเตรียม (เช่นคริสตัล) จากนั้นเมื่อศึกษาโครงสร้างเหล่านี้คุณจะต้องหมุนเวทีอย่างต่อเนื่องเพื่อให้ได้แสงของวัตถุกลุ่มหนึ่งหรือกลุ่มอื่น
เพื่อทำการวิเคราะห์เชิงลึกและประเมินปฏิกิริยาโทโพออปติคัลมากขึ้น จำเป็นต้องทราบวิธีการในการกำหนดสัญญาณสัมพัทธ์ของการรีฟริงเจนซ์ ขนาดของความแตกต่างในเส้นทางของรังสีและดัชนี (สัมประสิทธิ์) ของ การหักเหของแสง
สัญลักษณ์ของการหักเหของแสงแสดงถึงระดับและทิศทางของการกระจัดของเส้นทางของรังสีแสงที่ผ่านเครื่องวิเคราะห์ การเปลี่ยนแปลงนี้เกิดจากสีย้อมโทโพออปติคอล และหากมุ่งไปที่การลดความแตกต่างในเส้นทางของรังสี การเปลี่ยนแปลงดังกล่าวจะบ่งบอกถึงสัญญาณเชิงลบของการสะท้อนแสงสองทาง ( แอนไอโซโทรปีเชิงลบ) หากช่วยเพิ่มความแตกต่างในเส้นทางของรังสีแสดงว่ามีการระบุสัญญาณเชิงบวกของการสะท้อนแสง ( แอนไอโซโทรปีเชิงบวก). หากความแตกต่างในเส้นทางของรังสีหายไป เอฟเฟกต์แอนไอโซโทรปีจะถูกปรับระดับออก
สัญญาณของการสะท้อนกลับถูกกำหนดโดยใช้ตัวชดเชย ขั้นตอนการใช้งานมีดังนี้ วัตถุที่กำลังศึกษาอยู่ในตำแหน่งที่สามารถเรืองแสงได้สูงสุดของโครงสร้างแอนไอโซทรอปิกในขอบเขตการมองเห็นที่มืด แผ่นชดเชย RI จะหมุนรอบแกนลำแสงที่มุม +45° สัมพันธ์กับระนาบโพลาไรเซชันของเครื่องวิเคราะห์ วัตถุ ขึ้นอยู่กับความแตกต่างในเส้นทางของรังสีแสง ซึ่งอาจอยู่ในช่วง 20 ถึง 200 นาโนเมตร จะได้สีน้ำเงินหรือสีเหลือง ในกรณีแรกสัญญาณของการสะท้อนกลับเป็นบวกในส่วนที่สอง - เป็นลบ โปรดทราบว่าในกรณีที่ตัวชดเชยอยู่ที่มุม +45° พื้นหลังโดยรวมของขอบเขตการมองเห็นที่มืดจะมีโทนสีแดง
สามารถใช้ตัวชดเชย แล/4 (U-TP137) ได้เช่นกัน ขั้นตอนการใช้งานจะเหมือนกัน มีเพียงขอบเขตการมองเห็นเท่านั้นที่มีโทนสีเทาแทนที่จะเป็นสีแดง และวัตถุจะเรืองแสงโดยมีเครื่องหมายหักเหเป็นบวก และมืดลงด้วยเครื่องหมายลบ
การกำหนดเชิงปริมาณของความแตกต่างในเส้นทางของรังสีแสงซึ่งแสดงเป็นนาโนเมตรนั้นดำเนินการโดยใช้ตัวชดเชย Braque Köhler เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ให้ใช้สูตร:
Γ=Γแล×ซินφ
โดยที่ แล คือค่าคงที่ที่ผู้ผลิตทำเครื่องหมายไว้บนตัวชดเชย φ คือมุมการหมุนของตัวชดเชยที่สัมพันธ์กับระนาบโพลาไรเซชันของเครื่องวิเคราะห์
ดัชนีการหักเหของวัตถุแอนไอโซทรอปิกถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบ (ใต้กล้องจุลทรรศน์) กับวัตถุทดสอบที่วางอยู่ข้างๆ ของเหลวมาตรฐานที่มีดัชนีการหักเหของแสงที่ทราบจะถูกใช้เป็นวัตถุทดสอบ วัตถุและตัวอย่างจะถูกวางเคียงข้างกันบนเวที เมื่อดัชนีการหักเหของแสงไม่ตรงกัน เส้นแสงที่เรียกว่าเส้นเบ็คจะมองเห็นได้ระหว่างวัตถุกับตัวอย่าง การยกท่อกล้องจุลทรรศน์ให้สัมพันธ์กับตำแหน่งโฟกัสจะทำให้เส้นเบ็คเลื่อนไปทางตัวกลาง ซึ่งให้ผลการหักเหที่เด่นชัดมากขึ้น เมื่อดัชนีการหักเหของวัตถุและตัวอย่างตรงกัน เส้นเบ็คจะหายไป โดยทั่วไปแล้ว ดัชนีการหักเหของแสงจะถูกกำหนดในแสงสีเดียวสำหรับเส้นโซเดียมของสเปกตรัม (ที่ความยาวคลื่น 589 นาโนเมตรและอุณหภูมิ 20 ° C) ควรพิจารณาการหักเหของแสงสำหรับระนาบโพลาไรเซชันสองระนาบตั้งฉากกัน เพื่อจุดประสงค์นี้ เครื่องวิเคราะห์จะถูกถอดออกและการหักเหของวัตถุจะถูกบันทึกในตำแหน่งตั้งฉากกันทั้งสองตำแหน่ง ความแตกต่างระหว่างดัชนีการหักเหของแสงทั้งสอง (ng - nk) บ่งบอกถึงความแข็งแกร่งของการหักเหของแสง
คุณสมบัติของการประมวลผลวัสดุและการเตรียมการเตรียมการ
วัสดุตรึงสำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันในฟอร์มาลินที่เป็นกรดเป็นสิ่งที่ไม่พึงประสงค์ เนื่องจากเม็ดสีฟอร์มาลินที่เกิดขึ้นจากปฏิกิริยาระหว่างฮีโมโกลบินในเนื้อเยื่อกับฟอร์มาลดีไฮด์ที่เป็นกรดมีคุณสมบัติแอนไอโซโทรปิก และทำให้ยากต่อการศึกษาการเตรียมการในแสงโพลาไรซ์ G. Scheuner และ J. Hutschenreiter (1972) แนะนำให้ใช้ฟอร์มาลินที่เป็นกลาง 10% สารละลายแคลเซียมฟอร์มอลของ Baker และของเหลวของ Carnoy เพื่อจุดประสงค์นี้
ระยะเวลาในการตรึงในฟอร์มาลินที่เป็นกลาง 10% คือ 24 - 72 ชั่วโมงที่ 4 °C ในสารละลายแคลเซียมฟอร์มอลของ Baker - 16 - 24 ชั่วโมงที่ 4 °C การตรึงแคลเซียมฟอร์มอลเป็นที่ต้องการอย่างยิ่งเมื่อศึกษาสารประกอบไขมันและโปรตีน ของเหลวของ Carnoy ทำให้เนื้อผ้าอิ่มตัวอย่างรวดเร็ว ขึ้นรูปชิ้นงานที่มีความหนา 1 - 2 มม. ได้ภายในเวลาเพียง 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 °C การตรึงของเหลวของคาร์นอยไม่เหมาะสำหรับการศึกษาไขมัน นอกจากนี้ยังใช้ของเหลวของ Zenker โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อชุบด้วยเกลือทองคำและเงิน หลังการบำบัดด้วยส่วนผสมของของเหลวของ Zenker และกรดอะซิติก เซลล์เม็ดเลือดแดงจะได้รับความสามารถในการเกิดปฏิกิริยาไบรีฟริงก์
เมื่อตรวจสอบเนื้อเยื่อหนาแน่น (กระดูก ฟัน) ในกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ นอกเหนือจากการดีแคลซิฟิเคชั่นของกรดแล้ว ยังจำเป็นต้องมีการประมวลผลเพิ่มเติมเพื่อกำจัดเส้นใยคอลลาเจนออก เพื่อจุดประสงค์นี้ส่วนของเนื้อเยื่อดังกล่าวจะถูกต้มเป็นเวลาหลายนาทีในส่วนผสมของกลีเซอรีนและโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ (กลีเซอรีน 10 มล. และโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 2 เม็ด) จนกระทั่งขาวสนิทจากนั้นจึงระบายอัลคาไลออกอย่างระมัดระวังส่วนนั้นจะถูกล้างในน้ำ และย้ายด้วยแหนบไปยังขั้นกล้องจุลทรรศน์
สำหรับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน จะใช้ส่วนพาราฟิน ส่วนแช่แข็ง และส่วนไครโอสแตต ส่วนแช่แข็งที่ไม่มีรอยเปื้อนสำหรับการตรวจสอบภายใต้แสงโพลาไรซ์จะถูกฝังอยู่ในกลีเซอรอล ส่วนไครโอสแตตที่ไม่คงที่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันทันทีหลังการเตรียม เนื่องจากความไวสูงต่อผลกระทบที่สร้างความเสียหายจากปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อมต่างๆ ยังคงแนะนำให้แก้ไขส่วนเหล่านี้ในฟอร์มาลดีไฮด์ที่เป็นกลาง 10% หรือสารละลายแคลเซียมฟอร์มอล
ผลลัพธ์ของกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันได้รับอิทธิพลจากความหนาของส่วนเนื้อเยื่อวิทยา เมื่อศึกษาส่วนที่หนา จะมีการสร้างเงื่อนไขสำหรับการซ้อนทับของโครงสร้างแอนไอโซทรอปิกต่างๆ ที่ซ้อนทับกัน นอกจากนี้ ด้วยความหนาของชิ้นที่แตกต่างกัน คุณสมบัติแอนไอโซทรอปิกของโครงสร้างที่กำลังศึกษาอาจมีการเปลี่ยนแปลง ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาเปรียบเทียบ เพื่อให้แน่ใจว่าความหนาของชิ้นจะคงที่ ความหนาของส่วนสูงสุดที่แนะนำไม่ควรเกิน 10 µm
เงื่อนไขบังคับอีกประการหนึ่งคือการล้างขี้ผึ้งส่วนต่างๆ อย่างระมัดระวัง เนื่องจากสารตกค้างพาราฟินที่ไม่ถูกกำจัดออกจะทำให้เกิดปฏิกิริยาแอนไอโซโทรปีอย่างเด่นชัด ซึ่งทำให้การศึกษามีความซับซ้อน พาราฟินยังคงอยู่กับเซลล์เม็ดเลือดแดงและนิวเคลียสของเซลล์เป็นเวลานานเป็นพิเศษ เพื่อกำจัดพาราฟินออกจากส่วนต่างๆ อย่างสมบูรณ์ แนะนำให้ดำเนินการดังต่อไปนี้
- ไซลีน 30 นาที
- แอลกอฮอล์ 100% 5 นาที
- ส่วนผสมของเมทานอลและคลอโรฟอร์ม (1:1) ที่อุณหภูมิ 50 °C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง
- แอลกอฮอล์ 100% 5 นาที
- แอลกอฮอล์ 70% น้ำ 10 นาที
นอกจากนี้ควรระลึกไว้ด้วยว่าส่วนที่อยู่ภายใต้กล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันไม่ควรสัมผัสกับฟีนอล (เช่น ไม่ควรเคลียร์ด้วยคาร์โบลิกไซลีน)
ข้อมูลรายละเอียดเพิ่มเติมเกี่ยวกับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชันและการใช้ตัวชดเชยสามารถดูได้จากลิงก์ (http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/polarized/polarizedhome.html)
หากคุณมีคำถามใดๆ เกี่ยวกับกล้องจุลทรรศน์โพลาไรเซชัน โปรดติดต่อ School of Microscopy
ในบรรดาอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่หลากหลาย กล้องจุลทรรศน์แบบโพลาไรซ์ถือเป็นอุปกรณ์ที่ซับซ้อนทางเทคนิคมากที่สุด ความใส่ใจในการออกแบบอุปกรณ์ในแง่ของความสามารถในการผลิตนั้นเกิดจากการได้รับภาพที่มีคุณภาพสูงสุดซึ่งได้รับอิทธิพลโดยตรงจากการออกแบบชิ้นส่วนแสงและแสงของกล้องจุลทรรศน์ พื้นที่หลักของการใช้อุปกรณ์โพลาไรซ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์คือการศึกษาแร่ธาตุ ผลึก ตะกรัน วัตถุแอนไอโซทรอปิก สิ่งทอและผลิตภัณฑ์ทนไฟ รวมถึงวัสดุอื่น ๆ ที่มีลักษณะเป็นไบรีฟริงเจนซ์ หลักการหลังนี้ใช้เพื่อสร้างภาพในอุปกรณ์กล้องจุลทรรศน์ ซึ่งตัวอย่างที่กำลังศึกษาจะถูกฉายรังสีด้วยรังสีโพลาไรซ์ ในกรณีนี้ คุณสมบัติแอนไอโซทรอปิกของตัวอย่างจะปรากฏขึ้นหลังจากเปลี่ยนทิศทางของลำแสง เพื่อจุดประสงค์เหล่านี้ การออกแบบกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ประกอบด้วยฟิลเตอร์ภาคสนามที่หมุนในระนาบต่าง ๆ ที่สัมพันธ์กัน: เครื่องวิเคราะห์หมุนได้ 180 องศา และโพลาไรเซอร์หมุนได้ 360 คุณสมบัติหลักของอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์ในแสงโพลาไรซ์คือความสามารถในการดำเนินการออร์โธสโคปและ การศึกษาแบบส่องกล้องซึ่งไม่สามารถใช้ได้กับกล้องจุลทรรศน์ประเภทอื่นๆ ส่วนใหญ่
การศึกษาตัวอย่างภายใต้กล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์เริ่มต้นด้วยการติดตั้งโพลาไรเซอร์ในส่วนที่ให้แสงสว่างของกล้องจุลทรรศน์ใต้คอนเดนเซอร์ ถัดจากไดอะแฟรมรูรับแสง ในกรณีนี้ เครื่องวิเคราะห์จะอยู่ระหว่างช่องมองภาพและเลนส์ - ด้านหลังเลนส์ตามเส้นทางของรังสีแสง ด้วยการตั้งค่าอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์ที่ถูกต้อง หลังจากข้ามช่องกรองแล้ว ช่องที่มองเห็นได้จะมืดสม่ำเสมอ ก่อให้เกิดสิ่งที่เรียกว่าเอฟเฟกต์การสูญพันธุ์ เมื่อการตั้งค่าอุปกรณ์เสร็จสิ้น ตัวอย่างที่กำลังศึกษาจะได้รับการแก้ไขบนเวทีและทำการศึกษา ตารางของกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์จะอยู่ตรงกลางสัมพันธ์กับแกนแสงและสามารถหมุนได้ 360 องศา และในอุปกรณ์ที่คล้ายกันสำหรับวัตถุประสงค์ในห้องปฏิบัติการและการวิจัย ก็มีเวอร์เนียร์ด้วย เลนส์และระบบไฟส่องสว่างของกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์มีคุณภาพสูงสุดและมีความแม่นยำในการผลิตซึ่งช่วยให้คุณได้ภาพที่คมชัดที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้โดยไม่ผิดเพี้ยน บ่อยครั้งที่ชุดอุปกรณ์สำหรับศึกษาตัวอย่างในแสงโพลาไรซ์ประกอบด้วยตัวชดเชยและเลนส์ Bertrand วิธีแรกทำให้สามารถศึกษาโครงสร้างของแร่ธาตุได้อย่างมีประสิทธิภาพ และเลนส์ช่วยให้คุณสามารถขยายและโฟกัสพื้นที่การสังเกตได้เมื่อภาพเกิดการเปลี่ยนแปลงหลังจากหมุนเวที ปัจจุบันมีอุปกรณ์สำหรับกล้องจุลทรรศน์ดังกล่าวสามประเภทหลักในตลาด - กล้องจุลทรรศน์การวิจัยและห้องปฏิบัติการที่กล่าวถึงแล้วรวมถึงกล้องจุลทรรศน์โพลาไรซ์ที่ใช้งานได้