Polarizatsiyalangan mikroskop. Mikroorganizmlarning hujayra ichidagi tuzilmalarini yorug'lik mikroskopiyasi yordamida ko'rish. Fazali kontrastli mikroskopiya usuli
![Polarizatsiyalangan mikroskop. Mikroorganizmlarning hujayra ichidagi tuzilmalarini yorug'lik mikroskopiyasi yordamida ko'rish. Fazali kontrastli mikroskopiya usuli](https://i0.wp.com/meduniver.com/Medical/Microbiology/Img/211.jpg)
Polarizatsiya mikroskopiyasi bo'yalmagan anizotrop tuzilmalarning (masalan, kollagen tolalari, miofibrillalar yoki mikrob hujayralari) tasvirlarini olish imkonini beradi. Usulning printsipi ob'ektni o'zaro perpendikulyar tekisliklarda qutblangan ikkita nur hosil qilgan yorug'likda o'rganishga asoslangan.
Guruch. 11-4. Floresan mikroskopning diagrammasi.Interferentsiya mikroskopiyasi
Interferentsiya mikroskopiyasi faza-kontrast va polarizatsiya mikroskopiya tamoyillarini birlashtiradi. Usul bo'yalmagan ob'ektlarning kontrastli uch o'lchamli tasvirini olish uchun ishlatiladi. Usulning printsipi mikroskopda yorug'lik oqimini bo'lishga asoslangan; bir nur ob'ektdan o'tadi, ikkinchisi - undan o'tadi. Ikkala nur ham okulyarda ulanadi va bir-biriga aralashadi.
![](https://i0.wp.com/meduniver.com/Medical/Microbiology/Img/211.jpg)
Floresan mikroskopiyasi
Floresan mikroskopiya usuli qisqa to'lqinli nurlanish ta'sirida ba'zi moddalarning porlash qobiliyatiga asoslangan. Bunday holda, chiqarilgan yorug'lik to'lqinlari porlashni keltirib chiqaradigan to'lqindan uzunroqdir. Boshqacha qilib aytganda, lyuminestsent ob'ektlar bir to'lqin uzunligidagi yorug'likni o'zlashtiradi va spektrning boshqa hududida yorug'lik chiqaradi (11-4-rasm). Misol uchun, agar qo'zg'atuvchi nurlanish ko'k bo'lsa, natijada porlash qizil yoki sariq bo'lishi mumkin. Bu moddalar (flüoresan izosiyanat, akridin apelsin, rodamin va boshqalar) floresan (lyuminestsent) ob'ektlarni kuzatish uchun floresan bo'yoqlar sifatida ishlatiladi. Floresan mikroskopda manbadan keladigan yorug'lik (o'ta yuqori bosimli simob chiroq) ikkita filtrdan o'tadi.
![](https://i2.wp.com/meduniver.com/Medical/Microbiology/Img/212.jpg)
Birinchi (ko'k) filtr yorug'likni namunaning oldida ushlab turadi va namunaning floresansini qo'zg'atadigan to'lqin uzunligidagi yorug'likni uzatadi. Ikkinchi (sariq) ko'k nurni bloklaydi, lekin flüoresan ob'ekt tomonidan chiqarilgan va ko'z tomonidan qabul qilingan sariq, qizil, yashil nurni uzatadi. Odatda, o'rganilayotgan mikroorganizmlar to'g'ridan-to'g'ri yoki AT yoki ftorxromlar bilan etiketlangan lektinlar yordamida bo'yaladi. Preparatlar Ag yoki ob'ektning boshqa ligand-bog'lovchi tuzilmalari bilan o'zaro ta'sir qiladi. Floresan mikroskopiyasi floresan bo'yoqlar bilan belgilangan AT ning o'rganilayotgan ob'ektning Ag bilan o'ziga xos o'zaro ta'siriga asoslangan immunokimyoviy reaktsiyalar natijalarini vizualizatsiya qilish uchun keng qo'llanilishini topdi. Variantlar immunofluoresan reaktsiyalar shaklda keltirilgan. 11-5 va 11-6.
Yaxshi ishingizni bilimlar bazasiga yuborish oddiy. Quyidagi shakldan foydalaning
Talabalar, aspirantlar, bilimlar bazasidan o‘z o‘qishlarida va ishlarida foydalanayotgan yosh olimlar sizdan juda minnatdor bo‘lishadi.
E'lon qilingan http://www.allbest.ru/
Kirish
Nur mikroskopiyasi
Elektron mikroskopiya
Polarizatsiya mikroskopiyasi
1-ilova
Nur mikroskopiyasi
Yorug'lik mikroskopiyasi eng qadimiy va ayni paytda o'simlik va hayvon hujayralarini o'rganish va o'rganishning eng keng tarqalgan usullaridan biridir. Hujayralarni o'rganishning boshlanishi yorug'lik optik mikroskopining ixtirosi bilan sodir bo'lgan deb taxmin qilinadi. Yorug'lik mikroskopining asosiy xarakteristikasi yorug'lik mikroskopining aniqligi bo'lib, u yorug'lik to'lqin uzunligi bilan belgilanadi. Yorug'lik mikroskopining ruxsat chegarasi yorug'lik to'lqin uzunligi bilan belgilanadi; optik mikroskop yorug'lik nurlanishining to'lqin uzunligiga teng minimal o'lchamlarga ega bo'lgan tuzilmalarni o'rganish uchun ishlatiladi. Ko'pgina tarkibiy hujayralar optik zichlikda o'xshash va mikrokopiyadan oldin oldindan ishlov berishni talab qiladi, aks holda ular an'anaviy yorug'lik mikroskopi ostida deyarli ko'rinmaydi. Ularni ko'rinadigan qilish uchun ma'lum bir selektivlikka ega bo'lgan turli xil bo'yoqlardan foydalaniladi. Selektiv bo'yoqlardan foydalanib, hujayraning ichki tuzilishini batafsilroq o'rganish mumkin bo'ladi.
Masalan:
gematoksilin bo'yoqlari yadroning ba'zi tarkibiy qismlarini ko'k yoki binafsha rangga bo'yashadi;
phloroglucinol va keyin xlorid kislotasi bilan ketma-ket davolashdan so'ng, lignlangan hujayra membranalari gilos qizil rangga ega bo'ladi;
Sudan III bo'yoq suberizatsiyalangan hujayra membranalarini pushti rangga bo'yadi;
yodning kaliy yodiddagi kuchsiz eritmasi kraxmal donalarini ko‘k rangga aylantiradi”.
Mikroskopik tekshiruvlarni o'tkazishda ko'pchilik to'qimalar binoni oldidan o'rnatiladi.
Belgilanganidan keyin hujayralar bo'yoqlarni o'tkazuvchan bo'ladi va hujayra tuzilishi barqarorlashadi. Botanikada eng keng tarqalgan fiksatorlardan biri etil spirtidir.
Mikrokopiyaga preparatni tayyorlash jarayonida mikrotomda yupqa kesmalar tayyorlanadi (1-ilova, 1-rasm). Ushbu qurilma nonni kesish printsipidan foydalanadi. Hayvon to'qimalariga qaraganda o'simlik to'qimalari uchun bir oz qalinroq bo'laklar tayyorlanadi, chunki o'simlik hujayralari nisbatan kattaroqdir. O'simlik to'qimalarining bo'limlari qalinligi - 10 mikron - 20 mikron. Ba'zi to'qimalarni darhol kesish uchun juda yumshoq. Shuning uchun, fiksatsiyadan so'ng, ular eritilgan kerosin yoki maxsus qatronga quyiladi, bu esa butun matoni to'ydiradi. Sovutgandan so'ng, qattiq blok hosil bo'ladi, keyinchalik u mikrotom yordamida kesiladi. Bu o'simlik hujayralarida to'qima ramkasini tashkil etuvchi kuchli hujayra devorlariga ega ekanligi bilan izohlanadi. Lignified qobiqlar ayniqsa kuchli.
Tayyorgarlik paytida plomba ishlatilganda, kesish hujayra tuzilishiga zarar etkazish xavfini tug'diradi, buning oldini olish uchun tez muzlatish usulidan foydalaning. Ushbu usuldan foydalanganda siz mahkamlash va to'ldirishsiz qilishingiz mumkin. Muzlatilgan to'qimalar maxsus mikrotom - kriotom yordamida kesiladi (1-ilova, 2-rasm).
Muzlatilgan qismlar tabiiy struktura xususiyatlarini yaxshiroq saqlaydi. Biroq, ularni pishirish qiyinroq va muz kristallari mavjudligi ba'zi tafsilotlarni buzadi.
faza-kontrastli (1-ilova, 3-rasm) va interferentsion mikroskoplar (1-ilova, 4-rasm) tirik hujayralarni ularning tuzilishi tafsilotlarini aniq namoyon qilgan holda mikroskop ostida tekshirish imkonini beradi. Bu mikroskoplarda hujayraning turli qismlaridan ko'zga kiradigan to'lqinlarning amplitudasini oshiruvchi yoki kamaytiruvchi bir-biriga ta'sir qiluvchi (superpozitsiya qiluvchi) yorug'lik to'lqinlarining 2 tasi ishlatiladi.
Nur mikroskopining bir nechta navlari bor.
Yorqin dala usuli va uning navlari
O'tkazilgan yorug'lik maydoni usuli yorug'likni yutuvchi zarralar va detallarni (hayvon va o'simlik to'qimalarining yupqa rangli bo'laklari, minerallarning ingichka bo'laklari) o'z ichiga olgan shaffof preparatlarni o'rganishda qo'llaniladi. Preparat yo'q bo'lganda, kondensatordan linzadan o'tadigan yorug'lik nuri ko'zoynakning fokus tekisligi yaqinida bir xil yoritilgan maydon hosil qiladi. Agar preparatda changni yutish element mavjud bo'lsa, uning ustiga tushgan yorug'likning qisman so'rilishi va qisman tarqalishi sodir bo'ladi, bu esa tasvirning ko'rinishini keltirib chiqaradi. Usulni yutmaydigan narsalarni kuzatishda ham qo'llash mumkin, lekin ular yorug'lik nurini shunchalik kuchli sochsa, uning muhim qismi ob'ektivga tushmaydi.
Oblik yoritish usuli- oldingi usulning o'zgarishi. Ularning orasidagi farq shundaki, yorug'lik ob'ektga kuzatish yo'nalishiga katta burchak ostida yo'naltiriladi. Ba'zan bu soyalar shakllanishi tufayli ob'ektning "relyefi" ni ochishga yordam beradi.
Yoritilgan yorug'likdagi yorqin maydon usuli noaniq yorug'likni aks ettiruvchi ob'ektlarni, masalan, metall yoki rudalarning ingichka qismlarini o'rganishda foydalaniladi. Preparat yuqoridan, bir vaqtning o'zida kondensator rolini o'ynaydigan linzalar orqali yoritilgan (yorug'lik moslamasi va shaffof oynadan). Ob'ektiv tomonidan trubka linzalari bilan birgalikda tekislikda yaratilgan tasvirda, uning elementlarining aks ettirishdagi farqi tufayli preparatning tuzilishi ko'rinadi; Yorqin maydonda yorug'lik hodisasini ularga tarqatadigan bir hil bo'lmaganlar ham ajralib turadi.
Qorong'u maydon usuli va uning o'zgarishlari
O'tkazilgan yorug'lik qorong'i maydon usuli yorqin maydon usuli yordamida ko'rinmaydigan shaffof, yutmaydigan jismlarning tasvirlarini olish uchun ishlatiladi. Ko'pincha bu biologik ob'ektlardir. Yoritish moslamasi va oynadan olingan yorug'lik preparatga maxsus ishlab chiqilgan kondensator - deb ataladigan vosita tomonidan yo'naltiriladi. qorong'u maydon kondensatori. Kondenserdan chiqqandan so'ng, shaffof preparatdan o'tayotganda yo'nalishini o'zgartirmagan yorug'lik nurlarining asosiy qismi ichi bo'sh konus shaklida nur hosil qiladi va linzaga kirmaydi (bu konusning ichida joylashgan). . Mikroskopdagi tasvir slaydda joylashgan preparatning mikrozarrachalari tomonidan tarqaladigan nurlarning faqat kichik bir qismi yordamida konusga tushadi va linzadan o'tadi. Qorong'i fonda ko'rish sohasida preparatning strukturaviy elementlarining yorug'lik tasvirlari ko'rinadi, ular atrofdagi muhitdan sinishi indeksida farq qiladi. Katta zarrachalar faqat yorug'lik nurlarini tarqatadigan yorqin qirralarga ega. Bu usul yordamida zarrachalarning shaffof yoki shaffof emasligini yoki ularni o'rab turgan muhitga nisbatan yuqori yoki past sindirish ko'rsatkichiga ega ekanligini tasvirning ko'rinishidan aniqlash mumkin emas.
Elektron mikroskopiya
Birinchi elektron mikroskop 1931 yilda Germaniyada Knoll va Ruska tomonidan yaratilgan. Faqat 50-yillarda kerakli fazilatlarga ega bo'limlarni ishlab chiqarish usullari ishlab chiqilgan.
Elektron mikroskopiyaning qiyinchiliklari shundaki, biologik namunalarni o'rganish uchun preparatlarni maxsus qayta ishlash zarur.
Birinchi qiyinchilik shundaki, elektronlar juda cheklangan penetratsion kuchga ega, shuning uchun qalinligi 50 - 100 nm bo'lgan ultra yupqa qismlarni tayyorlash kerak. Bunday yupqa bo'laklarni olish uchun to'qimalar birinchi navbatda qatron bilan singdiriladi: qatron qattiq plastik blokni hosil qilish uchun polimerlanadi. Keyin o'tkir shisha yoki olmosli pichoq yordamida bo'limlar maxsus mikrotomda kesiladi.
Yana bir qiyinchilik bor: elektronlar biologik to'qimalardan o'tib ketganda, kontrastli tasvir olinmaydi. Kontrastni olish uchun biologik namunalarning ingichka bo'laklari og'ir metallarning tuzlari bilan singdiriladi.
Elektron mikroskoplarning ikkita asosiy turi mavjud. Transmissiya (uzatish) mikroskopida maxsus tayyorlangan namunadan o'tuvchi elektronlar nuri ekranda o'z tasvirini qoldiradi. Zamonaviy transmissiya elektron mikroskopining ruxsati yorug'likdan deyarli 400 baravar katta. Ushbu mikroskoplar taxminan 0,5 nm ruxsatga ega.
Bunday yuqori aniqlikka qaramay, transmissiya elektron mikroskoplari katta kamchiliklarga ega:
siz qattiq materiallar bilan ishlashingiz kerak;
ekrandagi tasvir ikki o'lchovli (tekis);
Og'ir metallar bilan ishlov berilganda, ba'zi uyali tuzilmalar yo'q qilinadi va o'zgartiriladi.
Skanerli elektron mikroskop (EM) yordamida uch o'lchamli (hajmli) tasvir olinadi. Bu erda nur namunadan o'tmaydi, balki uning yuzasidan aks etadi.
Sinov namunasi mahkamlanadi va quritiladi, shundan so'ng u nozik metall qatlam bilan qoplanadi, bu operatsiya soyalash deb ataladi (namuna soyalanadi).
EMni skanerlashda fokuslangan elektron nur namunaga yo'naltiriladi (namuna skanerlanadi). Natijada, namunaning metall yuzasi past energiyali ikkilamchi elektronlarni chiqaradi. Ular yozib olinadi va televizor ekranida tasvirga aylantiriladi. Skaner mikroskopining maksimal ruxsati kichik, taxminan 10 nm, lekin tasvir uch o'lchovli.
Elektron mikroskopning turlari:
Amplitudali elektron mikroskop- amplitudali elektron mikroskopiya usullaridan elektronlarni diffuz tarzda sochuvchi amorf va boshqa jismlarning (zarracha oʻlchamlari elektron mikroskopda echilgan masofadan kichikroq) tasvirlarini qayta ishlash uchun foydalanish mumkin. Transmissiya elektron mikroskopida, masalan, tasvirning kontrasti, ya'ni ob'ektning qo'shni hududlari tasvirining yorqinligi farqi, birinchi navbatda, bu maydonlarning qalinligi farqiga proportsionaldir.
Fazali elektron mikroskopiya- kristall jismlar tasvirlarining muntazam tuzilishga ega bo'lgan kontrastini hisoblash, shuningdek, teskari masalani hal qilish uchun - kuzatilgan tasvirdan ob'ektning tuzilishini hisoblash - fazali elektron mikroskopiya usullari qo'llaniladi. Elektron to'lqinning kristall panjaradagi diffraksiyasi muammosi ko'rib chiqiladi, uni hal qilishda elektronlarning ob'ekt bilan elastik bo'lmagan o'zaro ta'siri qo'shimcha ravishda hisobga olinadi: plazmalar, fononlar va boshqalar bilan tarqalish.O'tkazuvchi elektron mikroskoplarda va yuqori aniqlikdagi skanerlash uzatishda. elektron mikroskoplar, og'ir elementlarning alohida molekulalari yoki atomlarining tasvirlari olinadi. Fazali elektron mikroskopiya usullaridan foydalanib, tasvirlardan kristallar va biologik makromolekulalarning uch o'lchovli tuzilishini qayta qurish mumkin.
Miqdoriy elektron mikroskopiya- Miqdoriy elektron mikroskopiya usullari - o'rganilayotgan namuna yoki jarayonning turli parametrlarini aniq o'lchash, masalan, mahalliy elektr potentsiallarni, magnit maydonlarni, sirt relyefining mikrogeometriyasini va boshqalarni o'lchash.
Lorents elektron mikroskopiyasi- Lorents kuchi ta'sirida yuzaga keladigan hodisalar o'rganiladigan Lorents elektron mikroskopiyasining o'rganish sohasi ichki magnit va elektr maydonlari yoki tashqi adashgan maydonlar, masalan, yupqa plyonkalardagi magnit domenlar, ferroelektrik domenlar, boshlar maydonlari. axborotni magnitli yozib olish uchun va hokazo.
Polarizatsiya mikroskopiyasi
Polarizatsiya mikroskopiyasi optik anizotrop elementlarni o'z ichiga olgan (yoki butunlay shunday elementlardan tashkil topgan) preparatlarni mikroskopik tekshirish uchun qutblangan nurda kuzatish usuli. Bularga ko'plab minerallar, qotishmalarning yupqa bo'laklaridagi donalar, ba'zi hayvonlar va o'simliklar to'qimalari va boshqalar kiradi. Kuzatish o'tadigan va aks ettirilgan yorug'likda ham amalga oshirilishi mumkin. Yoritgich chiqaradigan yorug'lik polarizatordan o'tadi. Unga berilgan qutblanish yorug'likning preparat orqali (yoki undan aks etishi) keyingi o'tishi bilan o'zgaradi. Bu o'zgarishlar analizator va turli optik kompensatorlar yordamida o'rganiladi. Bunday o'zgarishlarni tahlil qilib, anizotrop mikroob'ektlarning asosiy optik xususiyatlarini hukm qilish mumkin: ikki sinishi kuchi, optik o'qlar soni va ularning yo'nalishi, qutblanish tekisligining aylanishi va dikroizm.
Fazali kontrast usuli
Usul faza kontrasti va uning xilma-xilligi - deb ataladi. usuli "anoptral" kontrast yorqin maydon usuli yordamida kuzatilganda ko‘rinmaydigan shaffof va rangsiz jismlarning tasvirlarini olish uchun mo‘ljallangan. Bularga, masalan, tirik bo'yalmagan hayvonlar to'qimalari kiradi. Usulning mohiyati shundaki, preparatning turli elementlarining sinishi ko'rsatkichlarida juda kichik farqlar bo'lsa ham, ular orqali o'tadigan yorug'lik to'lqini fazada turli xil o'zgarishlarga uchraydi (fazali relyef deb ataladigan narsaga ega bo'ladi). To'g'ridan-to'g'ri ko'z yoki fotografik plita tomonidan sezilmaydigan bu faza o'zgarishlari maxsus optik moslama yordamida yorug'lik to'lqinining amplitudasidagi o'zgarishlarga, ya'ni yorqinlikning o'zgarishiga ("amplituda relyefi") aylanadi. allaqachon ko'zga ko'rinadigan yoki fotosensitiv qatlamda qayd etilgan. Boshqacha qilib aytganda, paydo bo'lgan ko'rinadigan tasvirda yorqinlikning (amplituda) taqsimlanishi faza relefini takrorlaydi. Shu tarzda olingan tasvir faza-kontrast deb ataladi.
Usulning odatiy ish diagrammasi: teshigi halqa shakliga ega bo'lgan kondanserning oldingi fokusida diafragma diafragma o'rnatilgan. Uning tasviri linzalarning orqa diqqat markazida va shunday deb ataladigan joyda paydo bo'ladi. yuzasida halqasimon protrusion yoki halqasimon truba mavjud bo'lgan fazali plastinka, fazali halqa deb ataladi. Faza plitasi har doim ham linzalarning markazida joylashtirilmaydi - ko'pincha fazali halqa to'g'ridan-to'g'ri ob'ektiv linzalardan birining yuzasiga qo'llaniladi.
Qanday bo'lmasin, diafragma tasvirini beruvchi, preparatda burilmagan nurlantiruvchi nurlar faza halqasidan to'liq o'tishi kerak, bu ularni sezilarli darajada zaiflashtiradi (uni yutuvchi qiladi) va fazasini l/4 ga o'zgartiradi. (l - yorug'likning to'lqin uzunligi). Va nurlar, hatto tayyorgarlikda biroz chayqalgan (tarqalgan), fazali halqani chetlab o'tib, faza plitasidan o'tadi va qo'shimcha faza siljishiga duch kelmaydi.
Tayyorgarlik materialida fazalar siljishini hisobga olgan holda, egilgan va chetlanmagan nurlar orasidagi umumiy fazalar farqi 0 yoki l/2 ga yaqin bo'ladi va preparatning tasvir tekisligida yorug'likning aralashuvi natijasida ular bir-birini sezilarli darajada kuchaytiradi yoki zaiflashtiradi, bu preparatning tuzilishining kontrastli tasvirini beradi. Burilmagan nurlar og'ishmaganlarga nisbatan ancha past amplitudaga ega, shuning uchun faza halqasida asosiy nurni zaiflashtirish, amplituda qiymatlarini bir-biriga yaqinlashtirish, shuningdek, tasvirning katta kontrastiga olib keladi.
Usul yorqin maydon usulida juda past kontrastli kichik strukturaviy elementlarni ajratish imkonini beradi. Nisbatan kichik o'lchamdagi shaffof zarralar yorug'lik nurlarini shunday kichik burchaklarda sochadiki, bu nurlar faza halqasidan burilmaganlar bilan birga o'tadi. Bunday zarrachalar uchun faza-kontrast effekti faqat ularning konturlari yaqinida sodir bo'ladi, bu erda kuchli tarqalish sodir bo'ladi.
Infraqizil kuzatish usuli
Usul infraqizilda kuzatuvlar(IQ) nurlar, shuningdek, fotografiya yoki elektron-optik konvertor yordamida ko'zga ko'rinmaydigan tasvirni ko'rinadiganga aylantirishni talab qiladi. IQ mikroskopiyasi ko'rinadigan yorug'likda shaffof bo'lmagan ob'ektlarning ichki tuzilishini o'rganish imkonini beradi, masalan, quyuq oynalar, ba'zi kristallar va minerallar va boshqalar.
Ultraviyoleni kuzatish usuli
Usul ultrabinafsha (UV) nurlarida kuzatuvlar mikroskopning maksimal aniqligini oshirish imkonini beradi. Usulning asosiy afzalligi shundaki, ko'rinadigan yorug'likda shaffof bo'lgan ko'plab moddalarning zarralari ma'lum to'lqin uzunliklarining UV nurlanishini kuchli o'zlashtiradi va shuning uchun UV tasvirlarida osongina ajralib turadi. O'simlik va hayvon hujayralarida mavjud bo'lgan ko'plab moddalar (purin asoslari, pirimidin asoslari, ko'pchilik vitaminlar, aromatik aminokislotalar, ba'zi lipidlar, tiroksin va boshqalar) UV hududida xarakterli yutilish spektrlariga ega.
Ultrabinafsha nurlar inson ko'ziga ko'rinmas ekan, UV mikroskopidagi tasvirlar fotografik yoki elektron-optik konvertor yoki lyuminestsent ekran yordamida yozib olinadi. Preparat ultrabinafsha nurlanish spektrining uchta to'lqin uzunligida suratga olinadi. Olingan negativlarning har biri ko'rinadigan yorug'likning o'ziga xos rangi bilan yoritilgan (masalan, ko'k, yashil va qizil) va ularning barchasi bir vaqtning o'zida bitta ekranga proyeksiyalanadi. Natijada ultrabinafsha nurda preparatning singdirish qobiliyatiga qarab, ob'ektning an'anaviy ranglardagi rangli tasviri olinadi.
Mikrofotografiya va mikrokino- bu mikroskop yordamida fotosensitiv qatlamlardagi tasvirlarni olish. Bu usul mikroskopik tekshirishning barcha boshqa usullari bilan birgalikda keng qo'llaniladi. Mikrofotografiya va mikrokino uchun mikroskopning optik tizimini biroz qayta qurish talab qilinadi - bu ob'ektiv tomonidan berilgan tasvirga nisbatan okulyarning fokuslanishini vizual kuzatishdan farq qiladi. Mikrofotografiya tadqiqotni hujjatlashtirishda, ko'zga ko'rinmaydigan UV va IR nurlaridagi ob'ektlarni (yuqoriga qarang), shuningdek, lyuminestsent intensivligi past bo'lgan ob'ektlarni o'rganishda zarur. Mikrofilmli fotografiya vaqt o'tishi bilan yuzaga keladigan jarayonlarni (to'qima hujayralari va mikroorganizmlarning hayotiy faoliyati, kristallarning o'sishi, oddiy kimyoviy reaktsiyalarning paydo bo'lishi va boshqalar) o'rganishda ajralmas hisoblanadi.
Interferentsiya kontrasti usuli
Interferentsiya kontrasti usuli (interferentsiya mikroskopiyasi) mikroskopga kirayotganda har bir nurni bo'lishdan iborat. Olingan nurlardan biri kuzatilgan zarracha orqali, ikkinchisi - mikroskopning bir xil yoki qo'shimcha optik shoxchasi bo'ylab o'tadi. Mikroskopning okulyar qismida ikkala nur yana ulanadi va bir-biriga aralashadi. Kondensator va linzalar ikki sindiruvchi plitalar bilan jihozlangan bo'lib, ulardan birinchisi asl yorug'lik nurini ikkita nurga ajratadi, ikkinchisi esa ularni qayta birlashtiradi. Ob'ektdan o'tadigan nurlardan biri fazada kechiktiriladi (ikkinchi nurga nisbatan yo'l farqiga ega bo'ladi). Ushbu kechikishning kattaligi kompensator tomonidan o'lchanadi. Bu usul shaffof va rangsiz ob'ektlarni kuzatish imkonini beradi, lekin ularning tasvirlari ham ko'p rangli (interferentsiya ranglari) bo'lishi mumkin. Bu usul tirik to'qimalar va hujayralarni o'rganish uchun mos keladi va ko'p hollarda bu maqsadda qo'llaniladi. Interferentsiya kontrasti usuli ko'pincha boshqa mikroskopiya usullari bilan, xususan, qutblangan nurda kuzatish bilan birgalikda qo'llaniladi. Uni ultrabinafsha mikroskop bilan birgalikda ishlatish, masalan, ob'ektning umumiy quruq massasidagi nuklein kislotalarning tarkibini aniqlash imkonini beradi.
Lyuminesans nurida tadqiqot usuli
Usul luminesans nurida tadqiq qiladi ko'zga ko'rinmas ko'k-binafsha nurlar yoki ultrabinafsha nurlar bilan yoritilganda paydo bo'ladigan mikro-ob'ektlarning yashil-to'q sariq rangdagi nurlarini mikroskop ostida kuzatishdan iborat. Mikroskopning optik sxemasiga ikkita yorug'lik filtri kiritilgan. Ulardan biri kondanser oldiga qo'yilgan. U yoritgich manbasidan nurlanishni faqat ob'ektning o'zi (ichki luminesans) yoki preparatga kiritilgan va uning zarralari tomonidan so'rilgan maxsus bo'yoqlarning (ikkilamchi lyuminesans) lyuminesansini qo'zg'atadigan to'lqin uzunliklarida uzatadi. Ob'ektivdan keyin o'rnatiladigan ikkinchi filtr faqat lyuminestsent nurni kuzatuvchining ko'ziga (yoki fotosensitiv qatlamga) uzatadi. Floresan mikroskopida preparatlarning yuqoridan (ob'ektiv orqali, bu holda u ham kondensator bo'lib xizmat qiladi) va pastdan oddiy kondensator orqali yoritilishi qo'llaniladi. Usul mikrobiologiya, virusologiya, gistologiya, sitologiya, oziq-ovqat sanoati, tuproq tadqiqotlari, mikrokimyoviy tahlil va kamchiliklarni aniqlashda keng qo'llanilishini topdi. Ilovalarning bunday xilma-xilligi ko'zning juda yuqori rang sezgirligi va qorong'i, lyuminestsent bo'lmagan fonda o'z-o'zidan yorug'lik beruvchi ob'ekt tasvirining yuqori kontrasti bilan izohlanadi.
Replikatsiya usuli
Replikatsiya usuli massiv jismlarning sirt geometrik tuzilishini o'rganish uchun ishlatiladi. Bunday jism yuzasidan uglerod, kollodion, formvar va boshqalardan iborat yupqa plyonka ko'rinishidagi iz olinadi, sirt relyefini takrorlaydi va uzatuvchi elektron mikroskopda tekshiriladi. Odatda surma (sirtga kichik) burchak ostida elektronlarni kuchli sochuvchi og‘ir metall qatlami vakuumda replikaga püskürtülür, geometrik relyefning o‘simtalari va bo‘shliqlariga soya soladi.
Bezatish usuli
Bezatish usuli nafaqat sirtlarning geometrik tuzilishini, balki dislokatsiyalar, nuqta nuqsonlarining to'planishi, kristalli yuzlarning o'sish bosqichlari, domen tuzilishi va boshqalar mavjudligidan kelib chiqqan mikrodalalarni o'rganadi.Bu usulga ko'ra, bezak zarralarining juda nozik qatlami. (Au atomlari) avval namuna yuzasiga yotqiziladi , Pt va boshqalar, yarimo'tkazgichlar molekulalari yoki dielektriklar), asosan mikrodalalar to'plangan joylarda yotqiziladi va keyin bezak zarralari qo'shilgan nusxasi olib tashlanadi.
Hujayra fraktsiyalarini olish uchun har xil turdagi santrifugalash keng qo'llaniladi: differentsial santrifüjlash, zonal santrifugalash va muvozanat zichligi gradienti santrifüjlash. Santrifuga bilan bog'liq nazariy va amaliy masalalar Sayksning sharhida har tomonlama muhokama qilinadi.
Differensial sentrifugalash
Differensial santrifüjlashda namunalar ma'lum vaqt davomida ma'lum tezlikda santrifüj qilinadi, shundan so'ng supernatant chiqariladi. Bu usul cho'kish tezligida turlicha bo'lgan zarrachalarni ajratish uchun foydalidir. Masalan, 3000-5000 d da 5-10 minut sentrifugalash buzilmagan bakteriya hujayralarining cho'kishiga olib keladi, hujayra bo'laklarining ko'p qismi esa supernatantda qoladi. Hujayra devori fragmentlari va yirik membrana tuzilmalari 20000-50000 § haroratda 20 daqiqa davomida sentrifugalash orqali pelletlanadi, kichik membrana pufakchalari va ribosomalar esa 1 soat davomida 200 000 § sentrifugalashni talab qiladi.
Zonal santrifugalash
Zonal santrifüjlash bir xil suzuvchi zichlikka ega bo'lgan, ammo zarracha shakli va massasi bilan farq qiladigan tuzilmalarni ajratishning samarali usuli hisoblanadi. Masalan, ribosoma boʻlinmalarining ajralishi, polisomalarning turli sinflari va turli shakldagi DNK molekulalari. Santrifüjlash paqirli rotorlarda yoki maxsus mo'ljallangan zonali rotorlarda amalga oshiriladi; Santrifüj paytida konvektsiyani oldini olish uchun paqir rotorli stakanlarda yoki zonali rotor kamerasida zaif gradient (odatda sukroz) hosil bo'ladi. Namuna gradient ustunining eng yuqori qismida zona yoki tor chiziq shaklida qo'llaniladi. Hujayra osti zarralari uchun odatda 15 dan 40% gacha (w/v) sukroz gradienti qo'llaniladi.
Laue usuli
monokristallar uchun ishlatiladi. Namuna uzluksiz spektrli nur bilan nurlanadi, nur va kristalning o'zaro yo'nalishi o'zgarmaydi. Difraksion nurlanishning burchak taqsimoti individual diffraktsiya dog'lari (Lauegram) ko'rinishiga ega.
Debay-Sherrer usuli
Polikristallar va ularning aralashmalarini o'rganish uchun foydalaniladi. Namunadagi kristallarning tushayotgan monoxromatik nurga nisbatan tasodifiy orientatsiyasi difraksion nurlarni o‘qda tushgan nur bilan koaksiyal konuslar oilasiga aylantiradi. Ularning fotografik plyonkadagi tasviri (debyegramma) konsentrik halqalar shakliga ega bo'lib, ularning joylashuvi va intensivligi o'rganilayotgan moddaning tarkibini baholashga imkon beradi.
Hujayra madaniyati usuli
Ba'zi to'qimalarni alohida hujayralarga bo'lish mumkin, shunda hujayralar tirik qoladi va ko'pincha ko'payish qobiliyatiga ega. Bu fakt hujayraning tirik birlik sifatidagi g'oyasini aniq tasdiqlaydi. Shimgichni, ibtidoiy ko'p hujayrali organizmni elakdan o'tkazish orqali hujayralarga ajratish mumkin. Biroz vaqt o'tgach, bu hujayralar qayta bog'lanadi va shimgichni hosil qiladi. Hayvonlarning embrion to'qimalarini fermentlar yoki hujayralar orasidagi aloqalarni zaiflashtiradigan boshqa vositalar yordamida ajratish mumkin.
Amerikalik embriolog R.Garrison (1879-1959) birinchi bo'lib embrion va hatto ba'zi etuk hujayralar organizmdan tashqarida mos muhitda o'sishi va ko'payishi mumkinligini ko'rsatdi. Hujayra kulturasi deb ataladigan bu usul fransuz biologi A.Karrel (1873-1959) tomonidan mukammallashtirilgan. O'simlik hujayralarini kulturada ham o'stirish mumkin, lekin hayvonlar hujayralari bilan solishtirganda ular kattaroq bo'laklarni hosil qiladi va bir-biriga mustahkamroq yopishadi, shuning uchun to'qimalar alohida hujayralar emas, balki kultura o'sishi bilan hosil bo'ladi. Hujayra madaniyatida bir hujayradan butun katta yoshli o'simlik, masalan, sabzi etishtirilishi mumkin.
Mikrofigura usuli
Mikromanipulyator yordamida hujayraning alohida qismlarini olib tashlash, qo'shish yoki qandaydir tarzda o'zgartirish mumkin. Katta amyoba xujayrasi uchta asosiy komponentga bo'linishi mumkin - hujayra membranasi, sitoplazma va yadro, so'ngra bu komponentlar qayta birlashtirilib, tirik hujayra hosil bo'lishi mumkin. Shu tarzda turli turdagi amyobalarning tarkibiy qismlaridan tashkil topgan sun'iy hujayralarni olish mumkin.
Agar ba'zi hujayra komponentlarini sun'iy ravishda sintez qilish mumkin bo'lganini hisobga olsak, sun'iy hujayralarni yig'ish bo'yicha tajribalar laboratoriyada hayotning yangi shakllarini yaratish yo'lidagi birinchi qadam bo'lishi mumkin. Har bir organizm bitta hujayradan rivojlanganligi sababli, sun'iy hujayralarni ishlab chiqarish usuli printsipial jihatdan ma'lum bir turdagi organizmlarni qurishga imkon beradi, agar bir vaqtning o'zida mavjud hujayralardagidan bir oz farq qiladigan tarkibiy qismlardan foydalanilsa. Biroq, aslida, barcha hujayra tarkibiy qismlarining to'liq sintezi talab qilinmaydi. Hujayra tarkibiy qismlarining hammasi bo'lmasa ham ko'pchilikning tuzilishi nuklein kislotalar bilan belgilanadi. Shunday qilib, yangi organizmlarni yaratish muammosi yangi turdagi nuklein kislotalarni sintez qilish va ularni ma'lum hujayralardagi tabiiy nuklein kislotalarni almashtirish bilan bog'liq.
Hujayra sintezi usuli
Boshqa turdagi sun'iy hujayralarni bir xil yoki turli xil turdagi hujayralarni birlashtirish orqali olish mumkin. Birlashishga erishish uchun hujayralar virusli fermentlarga ta'sir qiladi; bu holda ikkita hujayraning tashqi yuzalari bir-biriga yopishtiriladi va ular orasidagi membrana vayron bo'ladi va ikkita xromosoma to'plami bitta yadroga o'ralgan hujayra hosil bo'ladi. Har xil turdagi yoki bo'linishning turli bosqichlarida hujayralarni birlashtirish mumkin. Bu usul yordamida sichqon va tovuq, odam va sichqon, odam va qurbaqaning gibrid hujayralarini olish mumkin edi. Bunday hujayralar dastlab gibrid bo'lib, ko'p hujayra bo'linishidan so'ng ular bir yoki boshqa turdagi xromosomalarning ko'p qismini yo'qotadilar. Yakuniy mahsulot, masalan, sichqonchaning hujayrasi bo'lib, unda inson genlari yo'q yoki faqat oz miqdorda mavjud. Oddiy va malign hujayralarning birlashishi alohida qiziqish uyg'otadi. Ba'zi hollarda duragaylar malign bo'lib qoladi, boshqalarida ular yo'q, ya'ni. ikkala xususiyat ham dominant, ham retsessiv sifatida namoyon bo'lishi mumkin. Bu natija kutilmagan emas, chunki malign o'sma turli omillar ta'sirida yuzaga kelishi mumkin va murakkab mexanizmga ega.
hujayra mikroskopining nuri
1-ilova
Shakl 2. Kriotoma 3-rasm. Fazali kontrastli mikroskop
4-rasm. Interferentsiyali mikroskop
Allbest.ru saytida e'lon qilingan
...Shunga o'xshash hujjatlar
Yorug'lik va elektron mikroskoplarning tuzilishi va ishlash tamoyillarini o'rganish. Qorong'u va yorqin maydon texnikasini ko'rib chiqish, fazali kontrastli mikroskopiya, interferentsiya va polarizatsiya. Hayotiy sobit hujayralarni o'rganish. Elektron mikroskopiya asoslari.
ma'ruza, qo'shilgan 05/16/2014
Skanerli tunnel mikroskopi, dastur. Atom kuch mikroskopining ishlash printsipi. Biologik ob'ektlar - makromolekulalar (shu jumladan DNK molekulalari), viruslar va boshqa biologik tuzilmalarni atom kuch mikroskopiyasi yordamida o'rganish.
kurs ishi, 2014-04-28 qo'shilgan
Elektron mikroskop tushunchasi elektron mikroskoplar yordamida jismlarning mikro tuzilmalarini va ularning mahalliy tarkibini o'rganish usullari to'plami sifatida. Namuna yuzasida elektronlar yoki ionlarning ingichka nurlarini skanerlashning televizion printsipining mazmuni.
taqdimot, 22/08/2015 qo'shilgan
Kichik ob'ektlarning o'lchamini o'lchash. Fazali kontrast usuli. Elektron optikasi haqida tushuncha. Elektron mikroskopni yaratish. Elektron diffraktsiyasi bo'yicha tajribalar. Hujayralar, viruslar va boshqa mikroob'ektlarning sirt geometrik tuzilishini tadqiq qilish.
taqdimot, 05/12/2017 qo'shilgan
Elektron mikroskopik tadqiqot usuli. Skanerli elektron mikroskopning fizik asoslari. Skanerli elektron mikroskopning sxemasi, uning tarkibiy qismlarining maqsadi va ularning ishlashi. Ob'ektlarni tadqiqotga tayyorlash va ularga qo'yiladigan maxsus talablar.
kurs ishi, 05.04.2011 qo'shilgan
Optik spektr diapazoni. Optik NDT usullarining nazariy asoslari. Yengil tebranishlar. Optik NDT usullarining tasnifi. Gazlar va suyuqliklarning diskret emissiya spektri. Har xil haroratli qattiq jismlarning ichki nurlanishining uzluksiz spektri.
referat, 15.01.2009 qo'shilgan
Qoliplar kapillyarlarining parametrlarini o'lchashda qo'llaniladigan usullarning umumiy tavsifi: golografik interferometriya, Furye optikasi, mikroskopik. Ko'rib chiqilayotgan usullarni qiyosiy tahlil qilish, ularning asosiy afzalliklari va kamchiliklarini aniqlash.
test, 20/05/2013 qo'shilgan
Atom kuch mikroskopini yaratish, ishlash printsipi, afzalliklari va kamchiliklari. Atom kuchi mikroskopiyasi usullari. Atom kuch mikroskopining texnik imkoniyatlari. Polimer plyonkalarning deformatsiyalarini tasvirlash uchun atom kuch mikroskopiyasini qo'llash.
kurs ishi, 11/14/2012 qo'shilgan
Mikroskop tarixi - yalang'och ko'zga ko'rinmas narsalarning kattalashtirilgan tasvirlarini olish uchun qurilma. Nur mikroskopiya usullari. Metalografik mikroskopning ishlash printsipi va tuzilishi. Metalllarni mikroskopik tekshirish usullari.
referat, 2009-06-10 qo'shilgan
Skanerli elektron mikroskopiya asoslari. Metall eritmalarini elektron mikroskopik tekshirishning uslubiy xususiyatlari. Metall eritmalarining sirt qatlamlari tuzilishini o'rganish uchun mo'ljallangan mikroskoplarning xususiyatlari.
E. Qorong'i maydon mikroskopiyasi.
18. Mikroskop optik va mexanik qismlardan iborat. Optik qismlar nima?
A. Naycha, okulyar, kondensator
B. Revolver, makro va mikrovintlar, oyna
C. Revolver, okulyar
D. Okulyar, kondensator, obyektiv
E. Naycha, okulyar, revolver
19. Ultrabinafsha nurlardan yorug'lik manbai sifatida foydalanilganda mikroskopning aniqligi ortadi. Qaysi mikroskopik qurilmalar bu yorug'lik manbasidan foydalanadi?
A. Qorong'i maydon va lyuminestsent
B. lyuminestsent, ultrabinafsha
S. Yengil va elektron
D.Faza kontrasti, ultrabinafsha
E. Polarizatsiya qiluvchi, ultrabinafsha
20. Mikroskop mexanik va optik qismlardan iborat. Mikroskopning qaysi qismlari diafragmaga ega?
A. Okuyar va obyektiv
B. Ko'zoynak va kondensator
C. Naycha va okulyar
D. Ob'ektiv va kondensator
E. Naycha, linza, okulyar
21. Eksperimentda hayotiy kuzatuv yordamida bir qator kimyoviy komponentlarni aniqlash zarur bo'lgan tirik ob'ektlar ishlatilgan. Qanday mikroskopik tekshirish usuli qo'llaniladi?
A. Fazali kontrastli mikroskopiya
B. Elektron mikroskopiya
C. Flüoresan mikroskopiya
E Qorong'i maydon mikroskopiyasi.
22. Hujayralarni gistologik tekshirish uchun fosforlar ishlatilgan. Bu holda mikroskopning qaysi turidan foydalanilgan?
A. Nur mikroskopiyasi
B. Elektron mikroskopiya
C. Flüoresan mikroskopiya
D. Polarizatsiya mikroskopiyasi
E. Qorong'i maydon mikroskopiyasi.
23. Tadqiqotchiga o'rganilayotgan ob'ektning tuzilmalari haqida fazoviy tushuncha olish vazifasi qo'yiladi. Mutaxassis qanday mikroskopik asbob bilan ishlaydi?
A. Ultraviyole mikroskopiya,
B. Fazali kontrastli mikroskopiya,
C. Transmissiya elektron mikroskopiyasi,
D. Skanerli elektron mikroskop,
E. Polarizatsiya mikroskopiyasi
24. Nur manbai sifatida simob-kvars lampalar ishlatiladi. Ushbu yorug'lik manbai bilan mikroskopning o'lchamlari qanday?
25. Mikroskopning aniqligi yorug'lik manbasining to'lqin uzunligiga bog'liq. Yorug'lik mikroskopining ajralish kuchi qanday?
26. Gistologik namunani tekshirishni boshlashdan oldin ko'rish maydonini bir xilda yoritish kerak. Buning uchun mikroskopning qaysi qismlari ishlatiladi?
A. Mikro- va makrovit
B. Kondensator va oyna
C. Naycha va trubka ushlagichi
D. Naycha va okulyar
27. Tadqiqotchi oldiga eritrotsitlar plazmalemmasining ultra-mikroskopik tuzilishini o‘rganish topshirildi. Qanday mikroskopik asbob ishlatiladi?
A. Svetova
B. Fazali kontrast
C. Elektron
D. Polarizatsiya
E. Ultraviyole
28. Skelet mushak to'qimasini o'rganishda to'qimalarning izo- va anizotrop tuzilmalarini aniqlash kerak. Mikroskopning qaysi turi qo'llaniladi?
A. Svetova
B. Fazali kontrast
C. Elektron
D. Polarizatsiya
E. Ultramikroskopik
29. Flüoresan mikroskopning ruxsati yorug'lik manbasining to'lqin uzunligiga bog'liq. Bu nimaga teng?
A. 0,1 mkm C. 0,4 mkm
B. 0,2 mkm D. 0,1 nm
30. Klinik laboratoriyada umumiy qon ro'yxatini o'rganish uchun mikroskopik tekshiruvlar qo'llaniladi. Buning uchun qanday mikroskop kerak?
A. Svetovoy,
B. Faza kontrasti,
S. Elektron,
D. Polarizatsiya,
E. Ultraviyole.
31. Tabiiy lyuminessensiyaga ega tirik ob'ekt tadqiqot uchun taqdim etilgan. Ushbu tadqiqot uchun qanday mikroskopdan foydalanish kerak?
A. Svetova
B. Fazali kontrast
C. Elektron
D. Polarizatsiya
E. Ultraviyole
32. Biopsiya natijasida o'simta hujayralari moddasi olindi. Ularning ultramikroskopik tuzilishini o'rganish kerak. Ushbu tadqiqotda qanday mikroskopiya turi qo'llaniladi?
A. Svetova
B. Fazali kontrast
C. Elektron
D. Polarizatsiya
E. Ultraviyole
2-MAVZU: GISTOLOGIK TEXNIKA
Yorug'lik va elektron mikroskopiya uchun preparatlar tayyorlashning asosiy tamoyillari, materialni olish (biopsiya, igna ponksiyon biopsiyasi, otopsiya). Ob'ektlarni mahkamlash, suvsizlantirish, siqish, mikrotomlar va ultramikrotomlar bo'yicha kesmalar tayyorlash. Mikropreparatlar turlari - kesma, smear, bosma, plyonka, yupqa kesma. Bo'yash va kontrastli preparatlar. Gistologik bo'yoqlar haqida tushuncha.
Mikroskopik texnika.
Sitologik va gistologik tahlilning asosiy bosqichlari:
Tadqiqot ob'ektini tanlash
Uni mikroskop ostida tekshirishga tayyorlash
Mikroskopiya usullarini qo'llash
Olingan tasvirlarning sifat va miqdoriy tahlili
Gistologik texnologiyada qo'llaniladigan usullar:
1. Umr bo'yi.
2. vafotidan keyin.
I INTERVITUAL USULLAR
Intravital tadqiqotning maqsadi hujayraning hayoti: harakati, bo'linishi, o'sishi, differentsiatsiyasi, hujayralarning o'zaro ta'siri, umr ko'rish davomiyligi, yo'q qilinishi, turli omillar ta'sirida reaktiv o'zgarishlar haqida ma'lumot olishdir.
Tirik hujayralar va to'qimalarni o'rganish tanadan tashqarida (in vitro) yoki tananing ichida (in vivo) mumkin.
A. Tirik hujayralar va to'qimalarni kulturada o'rganish (in vitro) –
Kultivatsiya usuli
Bular: a) suspenziya kulturalari (oziq muhitda muallaq bo'lgan hujayralar), b) to'qima, v) organ, d) bir qavatli.
To'qimalarni tanadan tashqarida etishtirish usuli eng keng tarqalgan. To'qimalarni maxsus shaffof, germetik yopiq kameralarda etishtirish mumkin. Steril sharoitda kameraga bir tomchi ozuqa muhiti qo'yiladi. Eng yaxshi ozuqa muhiti qon plazmasi bo'lib, unga embrion ekstrakti qo'shiladi (o'sishni rag'batlantiradigan ko'p miqdorda moddalarni o'z ichiga olgan embrion to'qimalaridan olingan ekstrakt). U erda ekish kerak bo'lgan organ yoki to'qimalarning bir qismi (1 mm3 dan ko'p bo'lmagan) ham joylashtiriladi.
O'stirilgan to'qima tadqiqot uchun olingan organizmning tana haroratida saqlanishi kerak. Ozuqa muhiti tezda yaroqsiz holga kelganligi sababli (kulturali to'qima tomonidan chiqarilgan parchalanish mahsulotlari unda to'planadi), uni har 3-5 kunda o'zgartirish kerak.
Kultivatsiya usulidan foydalanish hujayralarning bir-biri bilan, shuningdek viruslar va mikroblar bilan o'zaro ta'sirini, hujayralarning malign degeneratsiyasini, bir qator differensiallanish naqshlarini aniqlashga imkon berdi. Embrion to'qimalarni o'stirish suyak, xaftaga, teri va boshqalarning rivojlanishini o'rganishga imkon berdi.
O'stirish usuli inson hujayralari va to'qimalarida eksperimental kuzatishlar o'tkazishda, xususan, jinsni, malign degeneratsiyani, irsiy kasalliklarni va boshqalarni aniqlash uchun alohida ahamiyatga ega.
Usulning kamchiliklari:
1. Ushbu usulning asosiy kamchiligi shundaki, to'qima yoki organ tanadan ajratilgan holda tekshiriladi. Tananing neyroxumoral ta'sirini boshdan kechirmasdan, u o'ziga xos farqlanishini yo'qotadi.
2. Tez-tez transplantatsiya qilish zarurati (uzoq muddatli etishtirish bilan).
3. To'qimalarning bir xil sindirish ko'rsatkichi.
Tegishli ma'lumotlar.
Polarizatsiya mikroskopiyasi- morfologik tadqiqotning yuqori samarali usullaridan biri bo'lib, biologik tuzilmalarni aniqlash uchun keng imkoniyatlarga ega, bu qulaylik va nisbatan soddaligi bilan birgalikda uning yuqori qiymatini belgilaydi. Usul nafaqat preparatning gistologik tuzilishini, balki uning ba'zi gistokimyoviy ko'rsatkichlarini ham o'rganish imkonini beradi. XX asrning 40-50-yillarida. polarizatsiya mikroskopiyasi ultrastrukturali usul hisoblangan, chunki u to'qimalarning ultrastruktura qobiliyatini ko'rish imkonini berdi.
Polarizatsiya mikroskopiyasi ikki sinishi (anizotropiya) qobiliyatiga ega bo'lgan gistologik tuzilmalarning xususiyatlarini o'rganish uchun mo'ljallangan - anizotrop muhitdan o'tganda yorug'lik nurining bo'linishi. Anizotrop muhitdagi yorug'lik to'lqini elektromagnit to'lqinlarning o'zaro perpendikulyar tebranish tekisliklari bilan ikkita to'lqinga bo'linadi. Bu tekisliklar qutblanish tekisliklari deb ataladi. Polarizatsiyalangan yorug'lik oddiy (polyarizatsiyalanmagan) yorug'likdan farq qiladi, chunki ikkinchisida yorug'lik to'lqinlari turli tekisliklarda tebranadi, qutblangan yorug'likda esa ular faqat ma'lum bir tekislikda paydo bo'ladi.
Polarizatsiya effektini yaratish uchun polarizatsiya qiluvchi mikroskop ikkita polaroiddan foydalanadi. Birinchisi polarizator deb ataladi, u mikroskop yoritgichi va gistologik namuna orasiga joylashtiriladi, ikkinchi polaroid esa gistologik namuna va tadqiqotchining ko'zi o'rtasida joylashgan bo'lib, analizator hisoblanadi. Polarizator ham, analizator ham optik jihatdan bir xil polarizatsiya filtrlaridir, shuning uchun ularni almashtirish mumkin (agar mikroskopning dizayni bunga imkon bersa). Ilgari, polarizatsiya mikroskopiyasi uchun Islandiya shpatidan tayyorlangan Nikolas, Arens yoki Tomson prizmalaridan foydalanilgan. Bu prizmalar yorug'likning cheklangan sinishi burchagiga ega edi. Hozirgi vaqtda ularning o'rniga keng maydonli polarizatsiyalangan yorug'lik hosil qiluvchi tekis polarizatsiya filtrlari qo'llaniladi.
Polarizatsiyalangan yorug'likni yaratishda mikroskopning optik o'qiga nisbatan polarizator va analizatorning nisbiy holati hal qiluvchi rol o'ynaydi. Agar ular shunday yo'naltirilgan bo'lsa, ikkalasi ham bir tekislikda qutblangan nurni uzatadi, ya'ni. ularning polarizatsiya tekisliklari bir-biriga to'g'ri kelganda, ikkala polarizatsiya filtri ham qutblangan yorug'likni o'tkazishga qodir; mikroskopning ko'rish maydoni yorqin (1a-rasm).
Guruch. Inson o'pkasining 1 ta Brightfield namunasi, OlympusCX41, 10x ob'ektiv
Agar polarizatsiya filtrlarining qutblanish tekisliklari o'zaro perpendikulyar bo'lsa (bu analizatorni mikroskopning optik o'qi atrofida 90 ° aylantirish orqali erishiladi), u holda qutblangan yorug'lik o'tmaydi va tadqiqotchi qorong'i ko'rish maydonini ko'radi (1-rasm). 2).
Polarizator aylanayotganda 360 ° aylantirilganda, ko'rish maydoni ikki marta to'liq qorayadi va ikki marta to'liq ochiladi. Ilgari, qorong'u ko'rish maydoniga qizg'ish rang beradigan kompensatsion Bernauer filtrlari ishlatilgan ( U-TP530 ). Qora oyna filtrlaridan foydalanilganda, qoraygan ko'rish maydoni butunlay qorong'i ko'rinmaydi, aksincha, zaif yoritilgan.
2-rasm Polarizatsiyalangan nurda inson o'pkasi namunasi, 10x ob'ektiv
Qutblanuvchi filtrlarning kesishgan holatida (ya'ni ortoskopiyada) gistologik namunadagi anizotrop moddalar qutblangan yorug'lik yo'lida uchrasa, bu moddalar qutblangan yorug'likni yorug'likning o'zaro perpendikulyar tebranish tekisliklari bo'lgan ikkita nurga ajratadi. to'lqinlar. Tebranish tekisligi qutblanish tekisligiga to'g'ri keladigan yorug'lik nurlari analizator orqali o'tadi va tekislik perpendikulyarlari kesiladi, buning natijasida tadqiqotchining ko'ziga va kameraga tushayotgan yorug'lik oqimining intensivligi faqat yarmini tashkil qiladi. asl yorug'lik nurining intensivligi. Ta'riflangan jarayonlar natijasida ikkita kesishgan polarizator o'rtasida joylashgan anizotrop moddalar qorong'i fonda yorug'lik nurli jismlar shaklida ko'rinadi. Shu bilan birga, ikki sindirish qobiliyatiga ega bo'lmagan izotropik tuzilmalar qorong'i bo'lib qoladi.
Bu ham tanlovga ta'sir qiladi polarizatsiya mikroskopiyasi uchun kameralar. Vazifa qorong'u fonda kichik yorqin signallarni olishdan iborat bo'lganligi sababli, odatda yorqin maydon mikroskopiyasi uchun kamera kameraning past sezgirligi va yozish paytida hosil bo'ladigan katta shovqin tufayli etarli bo'lmasligi mumkin. Polarizatsiya qiluvchi mikroskop uchun Yuqori sezuvchanlik va aniq ranglarni ko'paytirishga ega mikroskop kamerasi talab qilinadi. CCD matritsalari (, VZ-CC50S) asosidagi kameralardan foydalanish afzalroq, ammo hozirgi bosqichda siz Sony IMX seriyali CMOS matritsalari () asosidagi kameralarning byudjet versiyalaridan ham foydalanishingiz mumkin.
Biologik to'qimalarda etarli miqdordagi anizotrop tuzilmalar mavjud: mushaklarning qisqarish apparati elementlari, amiloid, siydik kislotasi, kollagen hosilalari, ba'zi lipidlar, bir qator kristallar va boshqalar.
Anizotrop ob'ektda bo'linib, analizatordan o'tadigan yorug'lik nurlari teng bo'lmagan to'lqin tarqalish tezligi bilan tavsiflanadi. Ushbu farqning kattaligiga qarab (u ham deyiladi yorug'lik nurining kechikish qiymati) va analizatorda yorug'likni yutishdagi farqlar tufayli anizotrop jismlarning porlashi oq yoki rangli bo'lishi mumkin. Keyingi holatda biz dikroizm fenomeni haqida gapiramiz ( ikki tomonlama singdirish I). Polarizatsiyalangan maydonda o'rganilganda, rang effektlari, masalan, ko'plab kristallar tomonidan ishlab chiqariladi.
Ikki sinishi jarayoni molekulalari anizotrop tuzilmalarga yo'naltirilgan holda yotqizish qobiliyatiga ega bo'lgan ma'lum bo'yoqlardan foydalanish orqali kuchaytirilishi mumkin. Anizotropiya effektiga olib keladigan gistokimyoviy reaksiyalar topo-optik reaksiyalar deb ataladi (G. Romxanyi). Bunday reaktsiyalarning ikki turi mavjud - qo'shimcha va teskari. Qo'shimcha reaktsiyalar bilan yorug'lik nurining kechikishi ortadi, bu ijobiy anizotropiya deb ataladi; teskari reaktsiyalar bilan u kamayadi - salbiy anizotropiya.
Uskuna VA Uskunalar
Polarizatsiya mikroskopiyasi maxsus polarizatsiya mikroskoplari yordamida amalga oshiriladi. Misol tariqasida import qilingan mikroskoplarni nomlashimiz mumkin. Ko'pgina zamonaviy optik mikroskoplar polarizatsiya mikroskoplari uchun aksessuarlar bilan jihozlangan.
Polarizatsiya mikroskopiyasi uchun har qanday laboratoriya yoki tadqiqot darajasidagi yorug'lik mikroskopidan foydalanish mumkin. Ikkita polarizatsiya filtriga ega bo'lish kifoya, ulardan biri polarizator vazifasini bajaradi, yorug'lik manbai va namuna o'rtasida, ikkinchisi esa analizator rolini o'ynaydi, namuna va tadqiqotchining ko'zi o'rtasida joylashgan. Polarizator kondensatorga o'rnatilishi yoki uning ostiga dala diafragmasining ustiga joylashtirilishi mumkin va analizator revolverdagi uyaga yoki oraliq qo'shimchaga joylashtirilishi mumkin.
Shaklda. 3-rasmda polarizatsiya qiluvchi mikroskopning sxematik diagrammasi keltirilgan. Barcha yorug'lik mikroskoplari uchun umumiy bo'lgan komponentlardan tashqari, qutblashtiruvchi mikroskopda ikkita qutblashtiruvchi filtr (polarizator, odatda kondensator ostida joylashgan va analizator okulyarda joylashgan), shuningdek, kompensator mavjud. Analizator aylanishi kerak va aylanish darajasini aniqlash uchun tegishli gradusli shkala talab qilinadi.
Polarizatsiya qiluvchi mikroskop yorug'lik nurlarining yuqori zichligini ta'minlaydigan yorug'lik manbasidan foydalanadi. Bunday manba sifatida 12 V kuchlanishli 100 Vt chiroqni ishlatish tavsiya etiladi.Ba'zi turdagi tadqiqotlar uchun monoxromatik yorug'lik talab qilinadi. Shu maqsadda metall shovqin filtri qo'llaniladi, u eng yaxshi oyna ustida joylashgan. Polarizatorning oldiga yorug'lik tarqaladigan muzli shisha qo'yiladi, ya'ni. u va yorug'lik manbai o'rtasida, lekin polarizatordan keyin hech qanday holatda, chunki bu polarizatsiya filtrining funktsiyasini buzadi.
Ilgari polarizatsiya mikroskopiyasi uchun ichki kuchlanishsiz akromatik ob'ektivlardan foydalanilgan, ammo hozir ular kam uchraydi. Bugungi kunda polarizatsiya qiluvchi mikroskoplarda faqat ichki tarangliklarga ega bo'lmagan rejali akromatik maqsadlar qo'llaniladi. Apoxromatik linzalar faqat mikrofotoografiya paytida normal rangni ko'rsatish zarur bo'lgan hollarda qo'llanilishi mumkin.
Polarizatsiya qiluvchi mikroskoplar optik o'qga nisbatan pozitsiyasini o'zgartirish mumkin bo'lgan aylanadigan bosqich bilan jihozlangan. Jadvalning burilish burchagi uning atrofi bo'ylab belgilangan daraja shkalasi yordamida o'lchanadi. Polarizatsiya mikroskopidan samarali foydalanishning zaruriy shartlaridan biri markazlashtiruvchi vintlar yordamida aylanuvchi bosqichni ehtiyotkorlik bilan tekislashdir.
Polarizatsiya qiluvchi mikroskopning muhim elementi ob'ektiv va analizator o'rtasida, odatda mikroskop naychasida joylashgan kompensatordir. Kompensator - gips, kvarts yoki slyudaning maxsus turlaridan tayyorlangan plastinka. U nanometrlarda ifodalangan bo'lingan yorug'lik nurlarining yo'lidagi farqni o'lchash imkonini beradi. Kompensatorning ishlashi yorug'lik nurlari yo'lidagi farqni o'zgartirish, uni nolga kamaytirish yoki maksimal darajaga oshirish qobiliyati bilan ta'minlanadi. Bunga kompensatorni optik o'q atrofida aylantirish orqali erishiladi.
MIKROSKOPYA TEXNIKASI POLARIZALANGAN NORITDA
Qorong'i xonada polarizatsiya mikroskopiyasini o'tkazish qulayroqdir, chunki tadqiqotchining ko'ziga kiradigan yorug'lik oqimining intensivligi asl nusxaga nisbatan 2 baravar kamayadi. Mikroskop yoritgichini yoqqaningizdan so'ng, avvalo, polarizator yoki analizatorni aylantirish orqali ko'rish maydonining eng yorqin yoritilishiga erishing. Polarizatsiya filtrlarining bu holati ularning qutblanish tekisliklarining mos kelishiga mos keladi. Preparat sahnaga qo'yiladi va birinchi navbatda yorqin maydonda o'rganiladi. Keyin polarizatorni (yoki analizatorni) aylantirib, ko'rish maydoni imkon qadar qorayadi; bu filtr holati qutblanish tekisliklarining perpendikulyar joylashuviga mos keladi. Anizotropiya ta'sirini ochish uchun anizotrop ob'ektning qutblanish tekisligini qutblangan yorug'lik tekisligi bilan birlashtirish kerak. Empirik tarzda, bunga ob'ekt bosqichini optik o'q atrofida aylantirish orqali erishiladi. Agar polarizatsiya mikroskopiyasi uchun aylanish bosqichi bilan jihozlanmagan yorug'lik mikroskopi ishlatilsa, gistologik namunani qo'lda aylantirish kerak. Bu maqbuldir, ammo bu holda miqdoriy baholashni talab qiladigan qutblanish mikroskopining ma'lum turlarini amalga oshirish mumkin emas (qo'sh sinishi belgisini, yorug'lik nurlari yo'lidagi farqning kattaligini aniqlash).
Agar sinov namunasidagi anizotrop ob'ektlar tartibli joylashtirilgan bo'lsa (masalan, chiziqli mushak tolalarining anizotrop disklari), ularni bosqichning qattiq holatida o'rganish qulay, bu ob'ektlar qorong'i fonda maksimal lyuminestsentlikni beradi. . Agar anizotrop tuzilmalar preparatda (masalan, kristallar) xaotik tarzda joylashgan bo'lsa, ularni o'rganishda u yoki bu ob'ektlar guruhining porlashiga erishish uchun sahnani doimiy ravishda aylantirish kerak.
Topo-optik reaktsiyalarni chuqurroq tahlil qilish va baholash uchun ikki sinishining nisbiy belgisini, nurlar yo'lidagi farqning kattaligini va ko'rsatkichini (koeffitsientini) aniqlash metodologiyasini bilish kerak. sinishi.
Ikki sinishi belgisi analizatordan o'tadigan yorug'lik nurlari yo'lining siljish darajasi va yo'nalishini tavsiflaydi. Ushbu siljish topo-optik bo'yoqlardan kelib chiqadi va agar u nurlar yo'lidagi farqni kamaytirishga qaratilgan bo'lsa, ular ikki sindirishning salbiy belgisi haqida gapiradi ( salbiy anizotropiya), agar u nurlar yo'lidagi farqni oshirishga yordam bersa, u holda ikki sinishining ijobiy belgisi ko'rsatiladi ( ijobiy anizotropiya). Agar nurlar yo'lidagi farq yo'qolsa, anizotropiya effekti tekislanadi.
Ikki sinishi belgisi kompensator yordamida aniqlanadi. Uni qo'llash tartibi quyidagicha. O'rganilayotgan ob'ekt qorong'i ko'rish maydonida anizotropik tuzilmalarning maksimal lyuminestsensiyasiga erishiladigan joyga joylashtiriladi. RI kompensator plitasi optik o'q atrofida analizatorning polarizatsiya tekisligiga nisbatan +45 ° burchak ostida aylantiriladi. Ob'ekt 20 dan 200 nm gacha bo'lishi mumkin bo'lgan yorug'lik nurlarining yo'lidagi farqga qarab ko'k yoki sariq rangga ega bo'ladi. Birinchi holda, ikki sindirish belgisi ijobiy, ikkinchisida - salbiy. Shuni yodda tutish kerakki, kompensator +45 ° burchak ostida joylashgan bo'lsa, qoraygan ko'rish maydonining umumiy fonida qizil rang mavjud.
l/4 kompensator (U-TP137) ham ishlatilishi mumkin. Uni ishlatish tartibi bir xil, faqat ko'rish maydoni qizil emas, balki kulrang tusga ega va ob'ekt musbat sinishi belgisi bilan porlaydi va salbiy belgi bilan qorayadi.
Nanometrlarda ifodalangan yorug'lik nurlarining yo'lidagi farqni miqdoriy aniqlash Braque Köhler kompensatori yordamida amalga oshiriladi. Buning uchun formuladan foydalaning:
D=L×sinph
Bu yerda l - ishlab chiqaruvchi tomonidan kompensatorda belgilangan doimiy qiymat, ph - analizatorning qutblanish tekisligiga nisbatan kompensatorning burilish burchagi.
Anizotrop ob'ektning sindirish ko'rsatkichi uni (mikroskop ostida) yoniga qo'yilgan sinov ob'ekti bilan solishtirish orqali aniqlanadi. Sinov ob'ektlari sifatida ma'lum sinishi indeksiga ega standart suyuqliklar qo'llaniladi. Ob'ekt va namuna sahnada yonma-yon joylashtiriladi. Ularning sindirish ko'rsatkichlari mos kelmasa, ob'ekt va namuna o'rtasida Bek chizig'i deb nomlangan yorug'lik chizig'i ko'rinadi. Mikroskop trubkasini fokuslangan holatga nisbatan ko'tarish Bek chizig'ining muhit tomon siljishiga olib keladi, bu esa sinishining yanada aniq ta'sirini beradi. Ob'ekt va namunaning sindirish ko'rsatkichlari mos kelganda, Bek chizig'i yo'qoladi. Odatda, sinishi indeksi spektrning natriy chizig'i uchun monoxromatik nurda aniqlanadi (to'lqin uzunligi 589 nm va 20 ° S haroratda). Polarizatsiyaning ikkita o'zaro perpendikulyar tekisligi uchun sinishi aniqlanishi kerak. Buning uchun analizator chiqariladi va ob'ektning sinishi uning ikkita o'zaro perpendikulyar holatida qayd etiladi. Ikkala sindirish ko'rsatkichlari orasidagi farq (ng - nk) sinishi kuchini tavsiflaydi.
MATERIALLARNI QAYTA QILISH VA PREPARATLARNI TAYYORLASH XUSUSIYATLARI
Kislotali formalindagi polarizatsiya mikroskopiyasi uchun mahkamlash materiali istalmagan, chunki to'qima gemoglobinining kislotali formaldegid bilan o'zaro ta'siri natijasida hosil bo'lgan formalin pigmenti anizotrop xususiyatlarga ega va polarizatsiyalangan nurda preparatlarni o'rganishni qiyinlashtiradi. G. Scheuner va J. Hutschenreiter (1972) bu maqsadda 10% neytral formalin, Beykerning kaltsiy-formol eritmasi va Karnoy suyuqligidan foydalanishni tavsiya qiladi.
10% neytral formalinda fiksatsiya muddati 4 ° C da 24 - 72 soat, Beyker kaltsiy-formol eritmasida - 4 ° C da 16 - 24 soat. Lipid-oqsil birikmalarini o'rganishda kaltsiy-formolda fiksatsiya ayniqsa afzaldir. Carnoy suyuqligi matolarni tezda to'ydiradi. Qalinligi 1 - 2 mm bo'lgan qismlar faqat 1 soatdan keyin 4 ° C haroratda profillanishi mumkin. Karnoy suyuqligida fiksatsiya lipidlarni o'rganish uchun mos emas. Bundan tashqari, Zenker suyuqligi, ayniqsa, oltin va kumush tuzlari bilan singdirilganda ishlatiladi. Zenker suyuqligi va sirka kislotasi aralashmasi bilan ishlov berilgandan so'ng, qizil qon tanachalari ikki marta sinish qobiliyatiga ega bo'ladi.
Polarizatsiya qiluvchi mikroskopda zich to'qimalarni (suyaklar, tishlar) tekshirganda, kislota dekalsifikatsiyasidan tashqari, kollagen tolalarini olib tashlash uchun qo'shimcha ishlov berish talab etiladi. Shu maqsadda bunday to'qimalarning bo'laklari glitserin va kaliy gidroksid aralashmasida (10 ml glitserin va 2 dona kaliy gidroksid) bir necha daqiqa davomida to'liq oqlangunga qadar qaynatiladi, so'ngra ishqor ehtiyotkorlik bilan drenajlanadi, kesma suvda yuviladi. va pinset yordamida mikroskop bosqichiga o'tkaziladi.
Polarizatsiya mikroskopiyasi uchun kerosin, muzlatilgan va kriostat bo'limlari ishlatiladi. Polarizatsiyalangan yorug'lik ostida tekshirish uchun bo'yalmagan muzlatilgan qismlar glitseringa kiritilgan. Belgilanmagan kriostat bo'limlari tayyorlangandan so'ng darhol polarizatsiya mikroskopik tahlili uchun javob beradi. Turli xil atrof-muhit omillarining zararli ta'siriga yuqori sezuvchanligi tufayli, bu bo'limlarni hali ham 10% neytral formaldegid yoki kaltsiy-formol eritmasida mahkamlash tavsiya etiladi.
Polarizatsiya mikroskopining natijalariga gistologik bo'limlarning qalinligi ta'sir qiladi. Qalin kesimlarni o'rganishda turli anizotrop tuzilmalarning bir-birining ustiga superpozitsiyasi uchun sharoitlar yaratiladi. Bundan tashqari, har xil bo'lak qalinligi bilan, o'rganilayotgan tuzilmalarning anizotropik xususiyatlari o'zgarishi mumkin, shuning uchun, ayniqsa qiyosiy tadqiqotlarda, doimiy bo'lak qalinligini ta'minlash juda muhimdir. Tavsiya etilgan maksimal qism qalinligi 10 mkm dan oshmasligi kerak.
Yana bir majburiy shart - bu qismlarni ehtiyotkorlik bilan dewakslash, chunki olib tashlanmagan kerosin qoldiqlari aniq anizotropiya ta'sirini beradi va tadqiqotni murakkablashtiradi. Parafin, ayniqsa, qizil qon tanachalari va hujayra yadrolarida uzoq vaqt saqlanadi. Bo'limlardan kerosinni to'liq olib tashlash uchun quyidagi ishlov berishni amalga oshirish tavsiya etiladi.
- Ksilen 30 min
- Spirtli ichimliklar 100% 5 min
- Metanol va xloroform aralashmasi (1: 1) 50 ° C da 24 soat davomida
- Spirtli ichimliklar 100% 5 min
- Spirtli ichimliklar 70% 10 min Suv
Shuni ham yodda tutish kerakki, polarizatsiya mikroskopiyasiga duchor bo'lgan bo'limlar fenollar bilan aloqa qilmasligi kerak (masalan, ular karbolik ksilenda tozalanmasligi kerak).
Polarizatsiya mikroskopiyasi va kompensatorlardan foydalanish haqida batafsil ma'lumotni havoladan olishingiz mumkin (http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/polarized/polarizedhome.html).
Polarizatsiya mikroskopiyasi haqida savollaringiz bo'lsa, Mikroskopiya maktabiga murojaat qiling.
Mikroskopiya uchun barcha xilma-xil qurilmalar ichida polarizatsiya qiluvchi mikroskoplar texnik jihatdan eng murakkab hisoblanadi. Ishlab chiqarish imkoniyati bo'yicha qurilma dizayniga bunday e'tibor mikroskopning optik va yorug'lik qismlarini loyihalashdan bevosita ta'sir ko'rsatadigan eng yuqori sifatli tasvirlarni olish zarurati bilan bog'liq. Mikroskopiya uchun qutblanish moslamalarini qo'llashning asosiy yo'nalishi minerallar, kristallar, shlaklar, anizotrop ob'ektlar, to'qimachilik va o'tga chidamli mahsulotlarni, shuningdek, ikki sinishi bilan ajralib turadigan boshqa materiallarni o'rganishdir. Oxirgi printsip o'rganilayotgan namuna polarizatsiya nurlari bilan nurlanadigan mikroskop qurilmalarida tasvirlarni yaratish uchun ishlatiladi. Bunday holda, namunalarning anizotropik xususiyatlari nurning yo'nalishini o'zgartirgandan keyin paydo bo'ladi. Ushbu maqsadlar uchun polarizatsiya qiluvchi mikroskoplarning dizayni bir-biriga nisbatan turli tekisliklarda aylanadigan maydon filtrlarini o'z ichiga oladi: analizator 180 gradus, polarizator esa 360 ga aylanadi. Polarizatsiyalangan nurda mikroskopiya qilish uchun asboblarning asosiy xususiyati ortoskopik va ko'pgina boshqa mikroskop turlarida mavjud bo'lmagan konoskopik tadqiqotlar.
Polarizatsiya qiluvchi mikroskop ostida namunani o'rganish kondensator ostidagi mikroskopning yorituvchi qismiga, diafragma diafragmasining yoniga polarizatorni o'rnatishdan boshlanadi. Bunday holda, analizator okulyar va linzalar o'rtasida - ikkinchisining orqasida yorug'lik nurlari yo'li bo'ylab joylashgan. Mikroskop uchun bunday qurilmani to'g'ri o'rnatish bilan, filtr maydonlarini kesib o'tgandan so'ng, ko'rinadigan maydon bir xilda qorong'i bo'lib, so'nish effekti deb ataladi. Qurilma sozlamalari tugagandan so'ng, o'rganilayotgan namuna sahnaga o'rnatiladi va o'rganiladi. Polarizatsiya qiluvchi mikroskoplarning jadvallari optik o'qga nisbatan markazlashtirilgan va 360 gradusga aylantirilishi mumkin va laboratoriya va tadqiqot maqsadlari uchun shunga o'xshash qurilmalarda ular ham noniusga ega. Polarizatsiya qiluvchi mikroskoplarning optikasi va yorug'lik tizimi eng yuqori sifatga ega va bu aniq tasvirni buzilishsiz olish imkonini beruvchi ishlab chiqarish aniqligi. Ko'pincha, qutblangan nurda namunalarni o'rganish uchun asboblar to'plami kompensator va Bertrand linzalarini o'z ichiga oladi. Birinchisi, minerallarning tuzilishini samarali o'rganish imkonini beradi va linzalar sahnani aylantirgandan so'ng tasvir o'zgarishi sodir bo'lganda kuzatish maydonini kattalashtirish va fokuslash imkonini beradi. Bugungi kunda bozorda mikroskopiya uchun bunday qurilmalarning uchta asosiy turi mavjud - yuqorida aytib o'tilgan tadqiqot va laboratoriya mikroskoplari, shuningdek ishlaydigan polarizatsiya mikroskoplari.